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簡介：原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中己經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均己在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律責任由本人承擔。論文作者簽名單塹止日期砂華沙、，‘關(guān)于學位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解山東大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱本人授權(quán)山東大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定論文作者簽名導師簽名工嘎級日期WQS山東大學博士論文兒于出生時留取臍血檢測HBVDNA。入選研究的孕婦，均符合2000年全國肝炎會議擬定的無癥狀乙肝病毒攜帶者診斷標準。早產(chǎn)兒、低體重兒、窒息兒及有妊娠期出血史產(chǎn)婦所分娩的新生兒排除本研究。孕婦外周血和新生兒臍血血清中HBVDNA均陽性者作為研究組，孕婦外周血HBVDNA陽性但新生兒臍血血清中HBVDNA陰性者作為對照組，用PCR微板核酸雜交一ELISA法行HBV基因分型。所有新生兒于出生后12小時內(nèi)及第14天各注射乙肝免疫球蛋白HBIG200U，出生24小時內(nèi)、1月及6月齡共接種3次乙肝疫苗，對新生兒及嬰兒進行前瞻性隨訪研究，由產(chǎn)婦自愿選擇母乳喂養(yǎng)或人工喂養(yǎng)，分別于嬰兒7月及12個月時隨訪，檢測嬰兒外周靜脈血HBVDNA及乙肝血清標志物，同時詢問嬰兒喂養(yǎng)方法，母乳喂養(yǎng)1個月以上者為母乳喂養(yǎng)組，從未行母乳喂養(yǎng)的為人工喂養(yǎng)組，母乳喂養(yǎng)少于1月者排除本研究。嬰兒7月時未感染乙肝但抗一HBS陰性者給予乙肝疫苗5119加強注射。結(jié)果1乙肝血清學標志物HBSAGHBEAG及抗一HB。均陽性孕婦血清中HBVDNA均陽性，陽性率為1004949HBSAG與HBEAG陽性者HBVDNA陽性率亦為100A1616HBSAG及抗一HBC陽性者，HBVDNA陽性率為54171324HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者HBVDNA陽性率較低，僅為4173N2。單純HBSAG陽性和HBSAG及抗一HBE陽性孕婦無1例HBVDNA陽性。2HBSAGHBEAG及抗一HBC均陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率最高，為1837949HBSAG與HBEAG陽性及HBSAG與抗一HBC陽性者次之，分別為1250216及12503124HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者為133175。單純HBSAG陽性和HBSAG及抗一HBE陽性孕婦無1例新生兒臍血陽性。HBSAGHBEAG及抗一HBC均陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率與HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者有統(tǒng)計學意義Z29415P0002HBSAG與抗一HBC陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率與HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率有統(tǒng)計學意義P0043其余各組對比無統(tǒng)計學意義。315例臍血HBVDNA陽性的新生兒11例發(fā)生于HBEAG陽性的孕婦，陽性率為16921165，僅4例發(fā)生于HBEAG陰性的孕婦，陽性率為377O3774106HBEAG陽性與HBEAG陰性孕婦所生新生兒臍血HBVDNA陽性率有統(tǒng)計學意義X28706P0003。

簡介：該實驗在本室過去證實HTNV感染實驗動物體內(nèi)HSP70與NP存在形態(tài)共定位和蛋白分子相互結(jié)合的基礎(chǔ)上進一步研究了該感染模型中病毒NP、病毒囊膜糖蛋白G2與HSP70、HSP27及GRP94的相互關(guān)系并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建以HSP70為載體、NP為靶抗原的針對HFRS的DNA疫苗同時在原核體系中分析HSP70的表達條件并誘導其高效表達該實驗證明HTNV感染后有HSPS病毒蛋白復合物形成為研究HSPS在病毒感染復制中的作用以及抗病毒感染方面提供了實驗資料同時成功構(gòu)建可表達HSP70核蛋白復合物的融合真核表達質(zhì)粒并原核高效表達了HSP70為針對HFRS的DNA疫苗的研制打下基礎(chǔ)

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文雙調(diào)控減毒增殖腺病毒CNHK500治療肝癌的實驗研究姓名張琪申請學位級別博士專業(yè)外科學（肝外）指導教師吳孟超錢其軍20040501第二軍醫(yī)大學中文摘要博士論史雙調(diào)控減毒增殖腺病毒CNHK500治療肝癌的實驗研究【摘要】缺乏腫瘤特異性是現(xiàn)今許多腫瘤治療方案所共同面臨的一個主要問題，因此研發(fā)出新的腫瘤靶向機制的治療方法顯得非常必要。腫瘤細胞特異性增殖病毒，又稱溶瘤病毒，在腫瘤治療中極具前景，它具有選擇性地在腫瘤細胞中增殖、在腫瘤間自行擴散的優(yōu)點，且同現(xiàn)有的治療手段無交叉耐藥作用。到目前為止，已有十余種不同類型的選擇性增殖型病毒進入到臨床試驗中，其中包括選擇性增殖型腺病毒CRAD、單純皰疹病毒HSV、痘苗病毒、呼吸道腸道過濾性病毒及新城疫病毒。為達到選擇性增殖的目的，對選擇性增殖性腺病毒最常采用如下兩種分子改造策略其一選擇性缺失病毒在正常細胞復制必需而在腫瘤細胞中非必需的基因，這些基因包括腺病毒的EIA基因及E1B基因，它們可以滅活在腫瘤細胞內(nèi)常突變的抑癌基因RB或P53。這種改造后的增殖病毒在動物實驗中療效顯著，并已進入臨床試驗，經(jīng)典的如美國ONYX藥物公司研制的E1B一55KD缺失的ONYX一015，其聯(lián)合常規(guī)化療5FU、順鉑治療30例復發(fā)的頭頸部腫瘤患者，臨床有效率可達63％，但作為單劑治療療效僅在20％左右，可能同E1B基因同時也參與晚期MRNA轉(zhuǎn)運出核的過程這一特性有關(guān)。另一改造策略是利用組織或腫瘤特異性啟動子，如AFP、MUCL，PSA及PS2等，來調(diào)控腺病毒增殖的必需基因，這種改造后的病毒在動物實驗中非常成功，前列腺腫瘤特異性增殖型腺病毒CN一706及CV一787已進入臨床試驗，然而經(jīng)此途徑改造的病毒其增殖被局限于僅能表達相應腫瘤特異性抗原的腫瘤類型。腫瘤細胞的無限增殖和瘤內(nèi)缺氧微環(huán)境的存在是惡性實體瘤的主要特性。腫瘤的無限增殖能力主要靠端粒酶的激活來不斷地維持端粒的長度而達到的。端粒酶在大多惡性腫瘤細胞中處于激活狀態(tài)而在正常細胞中卻沒有活性或者活性很低，是目前所報道最為廣譜的腫瘤生物分子標記。人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶HTERT是維持端粒酶活性所必需的催化亞單位，它的表達調(diào)控在轉(zhuǎn)錄水平上。利用端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動子HTERT來調(diào)控病毒復制增殖所必需的基因，理論上可使病毒選擇性在端粒酶陽性的腫瘤細胞中增殖。同時在腫瘤細胞的惡性增殖過程中，不斷增多的腫瘤細胞導致細胞耗氧量的劇增，容易造成腫瘤內(nèi)缺氧微環(huán)境的形成，這在人實體瘤顯得尤為明顯。缺氧進而可誘導缺氧誘導因子一1HIF，1的形成，

簡介：目的該課題通過對慢性乙肝病毒攜帶者血漿皮質(zhì)醇水平及細胞免疫狀態(tài)的變化研究，從機體內(nèi)分泌系統(tǒng)對免疫系統(tǒng)的調(diào)控方面進一步探討HBV感染的慢性化的機制。方法慢性乙肝病毒攜帶者60例，其中HBEAG陽性者36例，HBEAG陰性者24例。正常對照10例。用放射免疫法測定血漿皮質(zhì)醇，用流式細胞法檢測外周血T細胞亞群，并對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果與正常對照比較，慢性乙肝病毒攜帶者血漿皮質(zhì)醇明顯升高。T淋巴細胞亞群中CD4細胞數(shù)比例有所下降但無統(tǒng)計學意義、CD4CD8比值明顯下降，CD8細胞數(shù)增多P＜001。HBEAG陽性組與HBEAG陰性組比較，HBEAG陽性組血漿皮質(zhì)醇升高P＜005，CD8細胞數(shù)比例增多，CD4CD8比值升高P＜005，二者在CD4細胞數(shù)無顯著差異P＞005。結(jié)論由以上結(jié)果，提示慢性乙肝病毒攜帶者存在著血漿皮質(zhì)醇水平的增高及細胞免疫功能的失衡，兩者之間可能存在著直接或間接的因果關(guān)系，對于進一步認識乙肝免疫耐受的機制及其如何打破這種免疫無應答狀態(tài)指導臨床治療可能具有重要意義。

簡介：目的探討山東地區(qū)慢性乙型肝炎、乙肝病毒攜帶者、乙肝病毒感染后自然恢復者與HLADRB1等位基因之間的相關(guān)性了解HBV感染后各種預后的遺傳背景。方法乙肝病毒相關(guān)抗原抗體系統(tǒng)采用酶聯(lián)免疫法進行檢測HBVDNA定量用ROCHELIGHTCYCLER熒光PCR檢測儀進行檢測肝功能包括轉(zhuǎn)氨酶、血漿白蛋白、球蛋白等使用全自動生化分析儀檢測HLADRB1等位基因采用聚合酶鏈反應序列特異性引物PCRSSP技術(shù)進行檢測。結(jié)果①、依據(jù)乙肝病毒相關(guān)抗原抗體指標和HBVDNA定量結(jié)果分為HBV高復制狀態(tài)和HBV低復制狀態(tài)進行二者之間的HLADRB1等位基因頻率的比較發(fā)現(xiàn)等位基因HLADRB10701在HBV高復制狀態(tài)組中出現(xiàn)頻率比低復制狀態(tài)組明顯升高45％VS125％P005。

簡介：第一部分SD大鼠乳鼠心肌細胞原代培養(yǎng)、CVB3感染心肌細胞模型的建立目的成功建立病毒性心肌炎病毒直接感染心肌細胞的體外模型，為進一步從心肌細胞分子生物學和病理學的角度，探討病毒性心肌炎病毒損傷階段的發(fā)病機理奠定基礎(chǔ)。方法以柯薩奇B3M病毒感染新生SD大鼠的培養(yǎng)心肌細胞，觀察感染后細胞病變、搏動情況、并用免疫組化法來確定心肌細胞的純度，采用RTPCR方法擴增出CVB3的特異性條帶。結(jié)果培養(yǎng)的SD大鼠搏動心肌細胞經(jīng)ΑACTIN免疫組化染色后確定其純度達到95％以上，感染柯薩奇B3病毒后，逐步出現(xiàn)了細胞病變，細胞停止搏動，心肌細胞培養(yǎng)上清液中肌酸激酶CKMB的含量明顯增高，RTPCR并可以擴增出CVB3特異性條帶。結(jié)論柯薩奇病毒感染心肌細胞的體外模型可以作為體外研究病毒性心肌炎的基礎(chǔ)。第二部分SOCS1基因和顯性突變體SOCS1基因綠色熒光表達載體的構(gòu)建及其在心肌細胞中的瞬時表達目的構(gòu)建SOCS1基因和顯性失活突變體SOCS1DNSOCS1基因的綠色熒光表達載體，并在心肌細胞中進行表達方法現(xiàn)將PCDNA30SOCS1和PCDNA30DNSOCS1兩個基因分別用ECI和XHOI進行限制性雙酶切得到SOCS1和DNSOCS1兩目的基因；然后將PEGFPC1用ECI和SALI進行雙酶切，得到載體片段，把兩個目的基因定向克隆到綠色熒光載體PEGFPC1中，即構(gòu)建了SOCS1和DNSOCS1兩基因的綠色熒光表達載體PEGFPC1SOCS1和PEGFPC1DNSOCS1。然后利用LIPOFECTAMINE2000轉(zhuǎn)染試劑介導將兩基因分別轉(zhuǎn)染到原代心肌細胞。結(jié)果在原代心肌細胞中成功表達了綠色熒光真核表達載體PEGFPC1SOCS1和PEGFPC1DNSOCS1，48小時表達效率達2520±625％。結(jié)論我們首先構(gòu)建了SOCS1和顯性失活突變SOCS1基因的綠色熒光表達載體PEGFPC1SOCS1和PEGFPC1DNSOCS1，利用脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染至心肌細胞中并成功的進行了表達，為下一步的研究奠定基礎(chǔ)。第三部分受病毒感染的心肌細胞中SOCS1降低IFNΓ誘導的JAKSTAT信號通路敏感性及機制的初步研究目的在病毒性心肌炎細胞模型中，觀察JAKSTAT信號通路的特異性內(nèi)源抑制物SOCS1及其顯性失活突變體SOCS1DNSOCS1對IFN?？笴VB3活性的影響。本研究將探索在病毒性心肌炎中SOCS1對IFNΓ信號轉(zhuǎn)導通路的作用，并從IFNΓ受體和干擾素誘導產(chǎn)物合成的水平研究其效應改變的機制。方法構(gòu)建PEGFPC1SOCS1及PEGFPC1DNSOCS1的真核表達載體，以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染至心肌細胞后，加用干擾素Γ刺激細胞并感染病毒，采用熒光顯微鏡檢測心肌細胞中SOCS1和DNSOC1的表達，同時利用WESTERNBLOT法測定不同條件下STAT1STAT3JAK1的表達水平并測定病毒滴度，采用RTPCR方法測定干擾素誘導產(chǎn)物2’，5’寡腺苷酸合成酶25OAS和干擾素Γ受體IFNGR1MRNA水平。結(jié)果與轉(zhuǎn)染DNSOCS1組相比，在轉(zhuǎn)染SOCS1組病毒滴度高，而心肌細胞存活率低，心肌細胞搏動時間短，磷酸化STAT1，JAK1的表達很少。而在DNSOCS1組，磷酸化STAT1，JAK1的表達更明顯，心肌細胞存活率高，細胞病變少見，干擾素誘導產(chǎn)物25OAS的MRNA表達較高。在轉(zhuǎn)染SOCS1和DNSOCS1組均無STAT3的磷酸化表達，另外，干擾素Γ受體和STAT3的水平不變。結(jié)論在病毒性心肌炎中，干擾素Γ激活了JAK1STAT1通路，同時SOCS1可以抑制干擾素誘導的抗病毒蛋白產(chǎn)物的表達，SOCS1參與了病毒性心肌炎的發(fā)生發(fā)展過程，可以為我們在治療病毒性心肌炎中提供一個新的治療靶點。

簡介：HPV感染是常見的性傳播疾病，與宮頸癌及泌尿生殖道相關(guān)癌癥的發(fā)生關(guān)系密切，嚴重危害人類健康。開發(fā)安全有效的HPV預防疫苗有望消滅或顯著降低。HPV感染造成的危害，具有十分重大的社會意義。我實驗室正在研究開發(fā)HPV基因工程疫苗，迫切需要可簡便有效對候選疫苗的保護性進行評估的方法。目前的HPV體外感染模型在實驗周期、穩(wěn)定性、滴度等方面存在各自的缺點，而新型實驗技術(shù)平臺的發(fā)展為構(gòu)建更有效的感染模型提供了有利條件。桿狀病毒近幾年來被發(fā)現(xiàn)可作為一種對哺乳動物細胞的新型基因轉(zhuǎn)移載體，相比其它基因轉(zhuǎn)移方法具有許多獨特的優(yōu)勢。本論文即探討了應用重組桿狀病毒在哺乳動物細胞中構(gòu)建HPV假病毒的可行性。為了更有效的獲得HPV假病毒本論文對重組桿狀病毒對哺乳動物細胞的基因轉(zhuǎn)移方法進行了研究，建立了更為簡便、快捷且高效的基因轉(zhuǎn)移方法。該方法被成功用于建立了有效的HPV16假病毒體外感染模型，以及鑒定桿狀病毒滴度的新方法。本研究利用BACTOBAC系統(tǒng)、增強型綠色熒光蛋白EGFP和CMVT7聯(lián)合啟動子構(gòu)建對哺乳動物細胞的桿狀病毒基因轉(zhuǎn)移載體，首先探討了直接使用重組桿狀病毒感染后的昆蟲細胞培養(yǎng)上清對哺乳動物細胞進行基因轉(zhuǎn)移的可行性。將重組桿狀病毒感染4D后的SF9細胞培養(yǎng)上清≥10107PFUML直接與HEPG2細胞37℃作用12H，可獲得高于95％的基因轉(zhuǎn)移效率，證明了重組桿狀病毒感染后的昆蟲細胞培養(yǎng)上清可直接用于高效轉(zhuǎn)導哺乳動物細胞。通過對轉(zhuǎn)導時間和稀釋比例的優(yōu)化，顯示用哺乳動物細胞培養(yǎng)基等體積稀釋后的帶毒上清可兼具高效和低損傷的特點。應用上述結(jié)果本研究首次提出并初步建立了重組桿狀病毒上清轉(zhuǎn)導法。該方法與脂質(zhì)體、重組逆轉(zhuǎn)錄病毒、重組痘苗病毒進行的對比顯示其具有高效、低毒的優(yōu)點。應用該方法對27種不同類型及組織來源的哺乳動物細胞進行基因轉(zhuǎn)移實驗，包括16種人類組織細胞、9種嚙齒類組織細胞和2種猴組織細胞，結(jié)果顯示該方法具有較好的適用性，可有效轉(zhuǎn)導大多數(shù)哺乳動物細胞。并發(fā)現(xiàn)重組桿狀病毒對靈長類來源細胞的基因轉(zhuǎn)移效率顯著高于對嚙齒類來源細胞，對貼壁細胞的基因轉(zhuǎn)移效率顯著高于對懸浮細胞。結(jié)合最新的研究進展，本研究進一步對病毒上清轉(zhuǎn)導法的實驗條件進行摸索優(yōu)化，并嘗試采用新方法提高轉(zhuǎn)導效率。對使用不同的稀釋緩沖液和轉(zhuǎn)導溫度的研究結(jié)果顯示，以PBS作為稀釋緩沖液在27℃下進行轉(zhuǎn)導可顯著提高轉(zhuǎn)導效率。在PBS環(huán)境中對比不同轉(zhuǎn)導時間和稀釋比例以及不同血清含量對轉(zhuǎn)導效果的影響結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)導效率與轉(zhuǎn)導時間和病毒用量均呈正相關(guān)，并首次發(fā)現(xiàn)PBS中存在血清成分不利于提高轉(zhuǎn)導效率。應用不同濃度丁酸鈉增強表達的實驗結(jié)果顯示，05～1MM的丁酸鈉較為合適于在CV1細胞中提高桿狀病毒載體的表達效率，更高濃度的丁酸鈉對細胞有明顯毒性。本研究首次在桿狀病毒轉(zhuǎn)導哺乳動物細胞中使用離心方法，結(jié)果顯示通過600G水平離心1H即可獲得高水平的轉(zhuǎn)導和表達效率，優(yōu)于在PBS環(huán)境中27℃孵育8H的效果，并進一步對離心時間、離心后孵育時間、緩沖液進行了摸索優(yōu)化。應用上述結(jié)果本研究首次提出并建立了重組桿狀病毒上清離心轉(zhuǎn)導法。病毒上清以PBS為緩沖環(huán)境600G水平離心1H進行轉(zhuǎn)導的方法可在獲得高轉(zhuǎn)導效率的同時顯著縮短實驗時間，提高了實驗效率。該方法具有簡便、快捷和高效的特點，并可作為一種常規(guī)操作方法用于日常實驗。本研究同時探討了輔助感染可表達T7RNA聚合酶的重組痘苗病毒VVT7RP對表達的影響，顯示輔助感染VVT7RP可顯著增強帶有CMVT7聯(lián)合啟動子的重組桿狀病毒的表達效果，表明將重組痘苗病毒VVT7RP與重組桿狀病毒結(jié)合可建立一種高效瞬時表達方法。本研究首次設(shè)計構(gòu)建了可同時在哺乳動物細胞中表達HPV16L1和L2蛋白的重組桿狀病毒，并采用本研究建立的重組桿狀病毒上清離心轉(zhuǎn)導法，探討了通過重組桿狀病毒轉(zhuǎn)導方法在哺乳動物細胞中表達組裝HPV16假病毒的可行性。細胞感染實驗和透射電鏡觀察結(jié)果證實，通過該方法成功獲得了具有感染能力的HPV16假病毒。應用已被證實的4株HPV16單抗，證明該假病毒感染模型可應用于進行中和實驗。應用該模型，從本實驗室構(gòu)建的18株HPV16單抗中篩選獲得2株中和單抗3D10和PD1，同時證明本實驗室構(gòu)建的候選基因工程疫苗HPV16VLP可激發(fā)BALBC小鼠產(chǎn)生具有中和能力的保護性體液免疫。該模型的成功建立為HPVL6中和抗體的篩選和HPV16預防疫苗的研究提供了必要的條件和有力的支持，也為進一步構(gòu)建其它型別的HPV假病毒體外感染模型提供了基礎(chǔ)。本研究還首次嘗試了使用HPV16假病毒對昆蟲細胞的感染實驗，顯示HPV16假病毒可能具有將核酸導入昆蟲細胞的能力。大量的關(guān)于重組桿狀病毒表達系統(tǒng)的應用研究實踐顯示，準確測定病毒滴度對于保持蛋白生產(chǎn)和研究實驗的穩(wěn)定性是十分重要的。本研究綜合了應用重組桿狀病毒上清離心轉(zhuǎn)導法可高效轉(zhuǎn)導哺乳動物細胞的特點以及輔助感染VVT7RP可顯著增強CMVT7聯(lián)合啟動子表達水平的特點，提出了新型的可在哺乳動物細胞中測定重組桿狀病毒滴度的方法。本研究設(shè)計構(gòu)建了同時具有在昆蟲細胞中和哺乳動物細胞中高效表達報告基因的重組桿狀病毒。應用該病毒首先在昆蟲細胞中準確測定滴度，再通過梯度稀釋后離心轉(zhuǎn)導CV1細胞并輔助感染VVT7RP，在12～24H后直接觀察細胞發(fā)光情況，以TCID50方法計算病毒滴度。結(jié)果顯示，以CMVT7聯(lián)合啟動子引導的EGFP報告基因表達元件在VVT7RP輔助下具有最高的檢測靈敏度，其測得的滴度與昆蟲細胞中測得的滴度相當，優(yōu)于單獨使用CMV啟動子或T7啟動子。本研究首次提出了可將CMVT7EGFP表達元件作為一種優(yōu)良的病毒滴度鑒定元件克隆于桿狀病毒載體上，其在昆蟲細胞中不會進行有效表達和干擾重組蛋白和病毒的生產(chǎn)，同時又可在哺乳動物細胞中進行高靈敏度和快速、直觀的檢測，不需要使用流式細胞儀進行分析。該方法為重組桿狀病毒滴度的測定提供了一種選擇。

簡介：本文為了更準確、更方便的尋找低毒高效的抗HBV藥物，建立了體外、體內(nèi)抗HBV藥物篩選體系，并進行中草藥抗HBV的研究，研究內(nèi)容如下1對荔枝核、紫玉盤、蠶蛾、田基黃、葉下珠、大黃等藥物進行提取，并運用HEPG2215細胞株進行抗乙肝病毒的體外研究，實驗結(jié)果表明廣西產(chǎn)的荔枝核對乙肝病毒有較好的抑制作用。2建立HEPG2215細胞株培養(yǎng)體系，同時使用SRBSUFHODAMINEB磺基羅丹明B細胞染色技術(shù)測定藥物對細胞的毒性、并采用PCR方法聚合酶鏈反應法結(jié)合熒光探針的體外擴增和檢測技術(shù)測定HBVDNA的含量。3采用光密度測定法和和定量PCR技術(shù)研究荔枝核提取物對HEPG2215細胞株HBSAG與HBEAG表達的抑制作用與HBVDNA含量的影響。96孔板試驗實驗第3、6天，荔枝核提取物800，400，200，100ΜGML對HEPG2215細胞HBSAG與HBEAG的表達有明顯的抑制作用與對照組比較P＜001。24孔板試驗。4體內(nèi)實驗采用桂林麻鴨先天感染DHBV的雛鴨作為動物模型，對荔枝核工業(yè)提取物進行抗乙肝病毒實驗，結(jié)果表明荔枝核工業(yè)提取物中劑量組2GKGD在用藥期間有抑制DHBVDNA的作用，與同組給藥前比較，T5時，P＜001；T10時，P＜001；與生理鹽水對照組比較，T15時，P＜005，鴨血清DHBVDNA均與給藥前T0比較明顯下降，抑制效果在第15天最好，結(jié)果表明荔枝核提取物在用藥期間具有一定的抑制乙肝病毒的作用。

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簡介：重慶醫(yī)科大學博士學位論文重組腺病毒HIF1Α基因治療腦缺血的實驗研究姓名陶陶申請學位級別博士專業(yè)神經(jīng)病學指導教師胡長林20050428重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文英文縮寫ADADHIF．1QAⅣFPBPBWCB．MECDNACSCLCIRDEPCDNADNTPDABDMSODTTDDWEDL’AEPEPOFCSGFPHEHIF1HIF．1DHRP】HC符號說明英文全稱ADENOVIRUSRECOMBINANTADENOVINLSCONTAININGHIF一1OGENEAMPIEILLINBASEPAIRBRAINWATERCONTENTBMEREAPTOETTHANOLCOMPLEMENTARYDEOXYNUCLEICACIDCHLORIDECESIUMCEREBRALISCHEMICREPERFUSIONDIETHYLPYROCARBONATEDEOXYNUCTEICACID。DEOXYNUCLEOSINETNPHOSPHATEDIAMINOBENZIDINEDIMETHYLSULFOXIDEDITHIOTHREITOLDOUBLEDILUTEDWATERETHYLENEDAMINETETRAACETICACIDEPPENDORFERYTHROPOIETINFETALCALFSELALMGREENFLUORESCENCEPROTEINHEMATOXYLINANDEOSINHYPOXIAINDUCIBLEFACTORIHYPOXIAINDUCIBLEFACTOR1ALPHAHORSERADISHPEROXIDASELMMUNOHISTOCHEMISTRY中文全稱腺病毒HIF．1O重組腺病毒氨芐青霉素堿基對腦水含量B．巰基乙醇互補脫氧核糖核酸氯化銫腦缺血再灌注焦碳酸二乙脂脫氧核糖核酸脫氧核苷三磷酸二氨基聯(lián)苯胺二甲基亞砜二硫蘇糖醇雙蒸水乙二胺四乙酸二鈉微量離心管紅細胞生成素胎牛血清綠色熒光蛋白蘇木精、伊紅缺氧誘導因子一1缺氧誘導因子1D辣根過氧化物酶免疫組化1

簡介：點擊查看更多SARS病毒膜融合抑制劑鑒定、S2結(jié)構(gòu)域原核表達及多克隆抗體的制備.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：本文共包括兩部分第一部分中，共合成化合物13個，其中格爾德霉素衍生物7個I～Ⅴ，Ⅸ，ⅩⅢ，末見文獻報道的化合物10個ⅣⅩⅢ。抗HSVⅠ活性測定中顯示出抑制HSVⅠ活性的化合物7個Ⅰ～Ⅴ，Ⅶ，Ⅷ。所得化合物結(jié)構(gòu)均經(jīng)過核磁1HNMR、質(zhì)譜確證?？笻SVⅠ活性結(jié)果顯示，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的抗HSVⅠ活性雖較格爾德霉素有所降低，但細胞毒性降低更為明顯。阿昔洛韋衍生物Ⅶ和Ⅷ均有較好的抑制HSVⅠ活性。在第二部分，建立了富馬酸替諾福韋酯光學異構(gòu)體含量以及富馬酸替諾福韋酯含量及有關(guān)物質(zhì)的HPLC檢測方法。富馬酸替諾福韋酯光學異構(gòu)體含量測定采用DAICELCHIRALCELODH5ΜM46250MM色譜柱，以正己烷異丙醇二乙胺851502％為流動相，流速為05MLMIN，柱溫為室溫，檢測波長為260NM。富馬酸替諾福韋酯含量及有關(guān)物質(zhì)的HPLC檢測采用ALLTECHMIXEDMODEC8ANION100A7ΜM25046MM色譜柱，乙腈磷酸鉀鹽緩沖液002MOLL，KOH調(diào)節(jié)PH至606535為流動相，10MLMIN流速，柱溫為室溫，檢測波長為260NM。

簡介：點擊查看更多綠色熒光蛋白表達的重組巨細胞病毒的構(gòu)建及抗巨細胞病毒藥物篩選.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：四川大學博士學位論文重組腺病毒載體介導的反義基質(zhì)金屬蛋白酶2基因治療增殖期血管瘤的實驗研究姓名曾凡偉申請學位級別博士專業(yè)外科學指導教師岑瑛20050418四川走學博士學位論文英文縮寫英文縮寫中文全名VECVASCULARENDOTHELIALCELL血管內(nèi)皮細胞ADADENOVIRUS腺病毒ADVADENOVIRSVECTOR腺病毒載體DMEMDUIBECCO’SMODIFIEDEAGLEMEDIUM極限必需培養(yǎng)基PCRPOLYMERASECHAIL3REACTION多聚合酶鏈反應ADAMMP一2腺病毒介導的反義基質(zhì)金屬蛋白酶一2ADGFP腺病毒介導的綠色熒光蛋白AMLP2AVERSEMMP一2反義基質(zhì)舍屬蛋白酶一2BDBASEPALR堿基對BSABOVINESERUMALBUMN小牛血清CDNACOAOIEMENTARYDNA互補脫氧核糖核酸CD，HUMANHEIITLOPOIELICPROGENITORANTIGEN人原始造血細胞抗原CPECYTOPATHETICEFFECT細胞病態(tài)效應DDAY天DABDIAMINOBENZIDIBE二氨基聯(lián)苯胺DMSODJMETHYLSULFOXIDE二亞基亞砜FCMFLOWCYTOMETRY流式細胞術(shù)；FPGREENFLUORESCENTPROTEIN綠色熒光蛋白HOUR小時