簡(jiǎn)介：南方醫(yī)科大學(xué)2005級(jí)在職碩士學(xué)位論文重組人P53腺病毒經(jīng)皮穿刺瘤內(nèi)注射治療脊柱轉(zhuǎn)移瘤的臨床研究CLINICALRESEARCHONTHETREATMENTOFMETASTATICSPINETUMORSPERCUTANEOUSINJECTEDWITHRECOMBINANTADENOVIRUSP53課題來(lái)源深圳市衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目基金200507120846A專業(yè)名稱骨科學(xué)學(xué)位申請(qǐng)人林健澤指導(dǎo)教師江建明教授答辯委員會(huì)主席鐘世鎮(zhèn)院士答辯委員會(huì)成員查振剛教授蔡道章教授黃東生教授劉少喻教授論文評(píng)閱人萬(wàn)勇教授戎利民教授朱青安教授2010年5月16日在職碩士學(xué)位論文重組人P53腺病毒經(jīng)皮穿刺瘤內(nèi)注射治療脊柱轉(zhuǎn)移瘤的臨床研究在職碩士研究生林健澤指導(dǎo)教師江建明教授摘要【背景】由于解剖和生物學(xué)特點(diǎn)，脊柱是骨轉(zhuǎn)移瘤最常見(jiàn)的好發(fā)部位。據(jù)資料統(tǒng)計(jì)，脊柱轉(zhuǎn)移痛的發(fā)生率是骨原發(fā)惡性腫瘤的35．40倍。據(jù)同外資料統(tǒng)計(jì)每年新確診的惡性腫瘤中，有2／3的病例已發(fā)生其他部位的轉(zhuǎn)移。隨著對(duì)原發(fā)惡性腫瘤治療方法的不斷改進(jìn)，病人渴望生存期的不斷延長(zhǎng)，它的遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移病灶逐漸成為影響生存率和生存質(zhì)量的重要因素。脊柱轉(zhuǎn)移瘤所造成的病理性骨折、脊髓壓迫、高鈣血癥和骨髓衰竭等并發(fā)癥，加速了病情的發(fā)展，嚴(yán)重地影響惡性腫瘤患者的生存質(zhì)量。盡管近年來(lái)，許多學(xué)者在脊柱轉(zhuǎn)移瘤的發(fā)生機(jī)制、防治方法等方面進(jìn)行了不懈的努力，但迄今為止仍未到有效的根治手段。由于脊柱解剖結(jié)構(gòu)的復(fù)雜及其與周圍重要組織結(jié)構(gòu)的密切關(guān)系，現(xiàn)多采用放療、化療，少數(shù)手術(shù)，但進(jìn)行脊柱轉(zhuǎn)移瘤的大部切除或徹底的根治性切除比較困難，且創(chuàng)傷大，出血量大，并發(fā)癥較多，所以脊柱轉(zhuǎn)移痛的治療仍存在爭(zhēng)議，脊柱轉(zhuǎn)移瘤的綜合性治療顯得尤為重要。P53基因是與腫瘤關(guān)系最密切的腫瘤抑制基因，60％以上的腫瘤存在P53基因的異常包括點(diǎn)突變、等位基閃缺失、重排、插入、基因融合等。P53基因與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及臨床療效均有密切關(guān)系。耳前研究認(rèn)為，P53基因

簡(jiǎn)介：流感是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，它的季節(jié)性暴發(fā)對(duì)人類的公共健康造成危害。近年來(lái)，高致病性禽流感在世界范圍流行，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，并且由于它可以侵染人類和極高的致死率引起了世界的廣泛關(guān)注。流感病毒是有包膜的負(fù)鏈RNA病毒，結(jié)構(gòu)由里到外依次是核衣殼、包膜和刺突。A型和B型流感病毒包膜上散布著形態(tài)不一的兩種蛋白刺突，分別是血凝素HEMAGGLUTININ，HA和神經(jīng)氨酸酶NEURAMINIDASE，NA。NA可以水解宿主細(xì)胞表面糖蛋白神經(jīng)氨酸，釋放出成熟的流感病毒體，并防止新生病毒體的聚集。NA具有抗原性，其抗體可以抑制新生流感病毒從宿主細(xì)胞內(nèi)釋放。因此NA在流感病毒復(fù)制過(guò)程中的作用至關(guān)重要。流感病毒變異快，疫苗的預(yù)防效果不理想。神經(jīng)氨酸酶NA抑制劑是近年來(lái)研制成功的新型抗流感病毒藥物，對(duì)于A、B型流感的治療和預(yù)防都有很好的效果。目前已經(jīng)上市的有吸入劑ZANAMIVIR和口服劑OSELTAMIVIR。扎那米韋ZANAMIVIR是澳大利亞BIOTASCIENCE公司研發(fā)的流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑。由GLAXOWELLCOME公司開(kāi)發(fā)生產(chǎn)并推向市場(chǎng)，商品名RELENZA，用于治療A和B型流感病毒導(dǎo)致的流行性感冒，是治療高致病性禽流感的有效藥物。扎那米韋是第一個(gè)神經(jīng)氨酸酶抑制劑類流感病毒治療藥，它的研制成功，被專家們認(rèn)為是治療流感方面取得的較大進(jìn)展。扎那米韋的合成一般以N乙酰基D神經(jīng)氨酸為起始原料，引入2，3不飽和鍵及4胍基。主要的合成路線都經(jīng)關(guān)鍵中間體7，8，9三O乙酰基N乙?；?，4二脫氧2，3脫氫4Α疊氮基D神經(jīng)氨酸甲酯。本課題的研究是為了響應(yīng)國(guó)家號(hào)召，打通扎那米韋的合成路線，制定工業(yè)化生產(chǎn)的工藝路線，為我國(guó)預(yù)防和治療禽流感儲(chǔ)備重要的應(yīng)急藥物。同時(shí)提供重要的原料中間體，為進(jìn)一步研究出活性更好的流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑奠定基礎(chǔ)。本文綜述了近年來(lái)流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑的研究進(jìn)展，優(yōu)選重組文獻(xiàn)報(bào)道的扎那米韋合成工藝路線，以N乙酰基D神經(jīng)氨酸為起始原料，經(jīng)酯化、?；h(huán)合、用三甲基硅疊氮立體選擇性引入4疊氮基，得到關(guān)鍵中間體7，8，9－三－O乙?；璑－乙酰基－2，4二脫氧－2，3－脫氫4Α疊氮基D神經(jīng)氨酸甲酯，再經(jīng)還原、與1－脒基吡唑單鹽酸鹽反應(yīng)引入4胍基后水解，共6步反應(yīng)合成了目標(biāo)產(chǎn)物扎那米韋，總收率15％，較文獻(xiàn)報(bào)道的最高收率10％提高了近50％。本文在文獻(xiàn)和專利的基礎(chǔ)上對(duì)扎那米韋的合成工藝路線進(jìn)行了改進(jìn)和優(yōu)化，減少了反應(yīng)步驟，簡(jiǎn)化了后處理操作，提高了收率，大幅度的降低了成本。同時(shí)，對(duì)扎那米韋的合成工藝進(jìn)行了詳細(xì)考察，得出各步反應(yīng)的影響因素及實(shí)驗(yàn)操作的控制方法。本文所采用的工藝路線經(jīng)中試放大得到進(jìn)一步證實(shí)。整條路線無(wú)特殊試劑和苛刻操作條件，無(wú)需硅膠柱色譜或制備型HPLC，重現(xiàn)性好，為工業(yè)放大奠定了扎實(shí)基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文EB病毒LMP1通過(guò)JAK和MAPK通路介導(dǎo)STAT3調(diào)控VEGF的分子機(jī)制研究姓名王禎蓮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師曹亞20070501碩士學(xué)位論文中文摘要LMPLSTAT3一、，EGF、ERKI陀／信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，證實(shí)LMPI在VEGF功能性活化中的病理生理學(xué)意義。為進(jìn)一步探討STAT3信號(hào)通路在鼻咽癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制。我們利用劃痕實(shí)驗(yàn)，證實(shí)LMPI調(diào)控的STAT3信號(hào)通路被干擾后，鼻咽癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力減弱，結(jié)合前面的研究結(jié)果提示LMPL可能通過(guò)STAT3信號(hào)通路的激活促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。這對(duì)于闡明LMPL作為致瘤蛋白在鼻咽癌侵襲與轉(zhuǎn)移中的分子機(jī)制提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。結(jié)合上述的研究結(jié)果，我們認(rèn)為L(zhǎng)MPI可通過(guò)JAK3和ERK上調(diào)STAT3的磷酸化水平和STAT的反式激活能力，促使STAT3入核后，反式激活VEGF酌啟動(dòng)子，促進(jìn)VEGF的表達(dá)和分泌，在鼻咽癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。本研究對(duì)進(jìn)一步闡明鼻咽癌發(fā)生發(fā)展規(guī)律，選擇STAT3作為新的治療靶點(diǎn)奠定了有意義的理論基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞LMPLJAKERKSTAT3VEGF鼻咽癌侵襲與轉(zhuǎn)移Ⅳ

簡(jiǎn)介：徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文條件增殖腺病毒介導(dǎo)IL18靶向治療惡性黑色素瘤的實(shí)驗(yàn)研究姓名楊春華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師劉彥群鄭駿年20080401徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文論文獨(dú)創(chuàng)性聲明是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。其他同志對(duì)本研究的啟發(fā)和所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的聲明并表示了謝意。作者簽名論文使用授權(quán)聲明本人完全了解徐州醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定。作者簽名揚(yáng)盎壘導(dǎo)師簽名少LR月捌’●163

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文乙型肝炎病毒在人類卵母細(xì)胞和早期胚胎內(nèi)整合的研究姓名胡小玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科指導(dǎo)教師朱依敏20070601浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文乙型肝炎病毒在人類卵母細(xì)胞和早期胚胎內(nèi)整合的研究浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科學(xué)2005級(jí)碩士研究生胡小玲導(dǎo)師朱依敏主任醫(yī)師摘要背景乙型肝炎是危害人類健康的全球性疾病。全球有20多億人有乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，鵬V的感染史，其中約有35億人為HBV的慢性攜帶者。目前，約有I／3的世界人口生活在IIBV感染率較高的地區(qū)HBY的感染與80％的原發(fā)性肝細(xì)胞癌具有相關(guān)性，每年約有100多萬(wàn)人死于因HBV感染引起的嚴(yán)重肝臟疾病，哪已將TLBV的感染列為世晃第九大死亡原因。我國(guó)是乙型肝炎的高發(fā)區(qū)，乙型肝炎病毒表面抗原HEPATITISBSURFACEANTIGEN，HBSAG攜帶者達(dá)10％一15％，每年有50萬(wàn)一100萬(wàn)的新增病例。目前，經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)闹鲃?dòng)、被動(dòng)聯(lián)合免疫，能夠有效阻斷多數(shù)HBV的感染，但免疫接種后仍然有I0％～20％的嬰兒阻斷失敗，阻斷失敗的原因不明。HBV的傳播途徑有輸血；體液接觸包括血清、唾液、陰道分泌物，乳汁和精液接觸；宮內(nèi)感染；細(xì)胞、組織和器官移植；血液透析工具和藥物靜脈注射等。此外，還有一種新的、尚待證實(shí)的傳播方式，即垂直傳播。垂直傳播指患者的生殖細(xì)胞受病毒感染，在受精時(shí)由精子或卵細(xì)胞作為載體。將病毒基因帶到胚胎進(jìn)而使子代患病。按性別劃分，垂直傳播又分為父嬰垂直傳播和母嬰垂直傳播。阻斷失敗是否與垂直傳播相關(guān)對(duì)于HBV垂直傳播的研究可能有助于這一問(wèn)題的回答。關(guān)于父嬰垂直傳播，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)此進(jìn)行了相關(guān)研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，槽子內(nèi)存在著HBVDNA的整合，并且主要存在于乙型肝炎患者精子頭的膜部和核心部，精子被感染的機(jī)制涉及對(duì)HBVDNA的主動(dòng)捕獲，’這些研究表明HBV可能通浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)Y2061482

簡(jiǎn)介：目的進(jìn)一步探討中藥寧心顆粒對(duì)小兒病毒性心肌炎氣陰兩虛證的臨床療效及安全性。方法將60例符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的病毒性心肌炎患兒隨機(jī)分為兩組治療組和對(duì)照組各30例經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩組患兒在性別、年齡、病程、病情等方面均無(wú)顯著性差異。治療組給予寧心顆粒口服對(duì)照組給予能量合劑ATP、輔酶A、維生素C、肌苷、病毒唑靜脈滴注療程為一個(gè)月。觀察治療前后臨床癥狀體征、血清學(xué)指標(biāo)肌酸激酶CK、肌酸激酶同工酶CKMB、肌鈣蛋白ICTNI、心電圖、24小時(shí)動(dòng)態(tài)心電圖早搏次數(shù)、心功能的變化。結(jié)果寧心顆粒能明顯改善病毒性心肌炎患兒的臨床癥狀和體征、減少早搏降低血清學(xué)指標(biāo)CK、CKMB、CTNI改善心功能對(duì)病毒性心肌炎有顯著療效。結(jié)論寧心顆粒是治療小兒病毒性心肌炎氣陰兩虛證的有效藥物且無(wú)明顯不良反應(yīng)。

簡(jiǎn)介：目的構(gòu)建人巨細(xì)胞病毒HCMVIE1核酸疫苗PCDNA31IE1通過(guò)免疫BALBC小鼠初步研究其產(chǎn)生的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平為進(jìn)一步研發(fā)HCMVIE1疫苗奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法1將重組載體PEGFPC1IE1用ECⅠ和HINDⅢ雙酶切與載體PCDNA31連接構(gòu)建重組質(zhì)粒PCDNA31IE1雙酶切鑒定。2將重組質(zhì)粒PCDNA31IE1轉(zhuǎn)染HELA細(xì)胞RTPCR及WESTERNBLOT測(cè)定IE1在真核細(xì)胞的表達(dá)。3將PCDNA31IE1、對(duì)照空質(zhì)粒PCDNA31及PBS分別通過(guò)肌肉注射8W齡BALBC小鼠隔2W免疫1次共免疫4次。4末次免疫小鼠2W后取小鼠肌肉組織通過(guò)PCR法檢測(cè)IE1基因免疫組化測(cè)定IE1基因在小鼠肌細(xì)胞中的表達(dá)。5末次免疫小鼠2W后無(wú)菌制備小鼠脾細(xì)胞經(jīng)PHA刺激后ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL4、IL2、IFNΓ含量MTT比色法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)計(jì)算刺激指數(shù)SI。用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS130分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果1構(gòu)建的真核細(xì)胞表達(dá)載體PCDNA31IE1經(jīng)雙酶切后小片段約1476BP與IE1大小一致。2PCDNA31IE1轉(zhuǎn)染HELA細(xì)胞后RTPCR檢測(cè)到約1476BP片段與IE1大小相符WESTERNBLOT檢測(cè)到分子量約72KDA的IE1蛋白。3在免疫小鼠肌細(xì)胞中利用PCR檢測(cè)到約1476BP片段與IE1大小一致即IE1基因在小鼠肌細(xì)胞中穩(wěn)定存在免疫組化結(jié)果顯示IE1基因在小鼠肌細(xì)胞中表達(dá)IE1目的蛋白。4核酸疫苗免疫組小鼠脾淋巴細(xì)胞經(jīng)PHA刺激后培養(yǎng)上清液中IL4含量為3047±176PGML與空質(zhì)粒組2688±260PGML和PBS組2506±260PGML比較差異有顯著性P5核酸疫苗組小鼠脾淋巴細(xì)胞經(jīng)PHA刺激后SI為355±048與空質(zhì)粒組186±023和PBS組148±011比較差異有顯著性P結(jié)論1成功構(gòu)建了真核表達(dá)載體PCDNA31IE1且其能在真核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)HCMVIE1蛋白。2PCDNA31IE1核酸疫苗能在BALBC小鼠肌細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且能在其肌細(xì)胞中表達(dá)HCMVIE1蛋白。3PCDNA31IE1核酸疫苗可誘導(dǎo)BALBC小鼠脾細(xì)胞分泌IL4、IL2、IFNR和刺激BALBC小鼠脾細(xì)胞增殖。

簡(jiǎn)介：登革病毒DENGUEVIRUS，DV是黃病毒屬的單股正鏈RNA病毒，分為四個(gè)血清型DV1～4。DV主要通過(guò)埃及伊蚊和白紋伊蚊傳播，每種血清型都可引起人類登革熱CLASSICALDENGUEFEVER，DF和登革出血熱登革休克綜合征DENGUEHEMRHAGICFEVERDENGUESHOCKSYNDROME，DHFDSS。近年來(lái)，隨著旅游業(yè)的發(fā)展和地球溫暖化，DF和DHFDSS流行、暴發(fā)越來(lái)越頻繁。DHFDSS患者病死率高，發(fā)病機(jī)制不清。較多的臨床研究顯示肝細(xì)胞是DV的重要靶細(xì)胞之一，肝損害在DHFDSS發(fā)病過(guò)程中占有重要地位1肝組織中可以檢測(cè)到DV抗原，并能分離到具有感染性的病毒；2DV還可以感染體外培養(yǎng)的HEPG2，HUH7，HA22T，HEP3B，PLC等人類肝癌細(xì)胞株，培養(yǎng)上清中也可檢測(cè)到成熟的病毒顆粒；3DHFDSS病人常常出現(xiàn)肝腫大，尸檢可見(jiàn)肝組織脂肪變性，枯否氏細(xì)胞肥大等。血清轉(zhuǎn)氨酶水平升高，凝血酶含量下降，其幅度變化與肝損害程度及出血、休克的發(fā)生密切相關(guān)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，DV可以直接感染肝細(xì)胞，引起肝臟損傷，換言之，肝臟可能是DV重要的靶器官之一。然而，在過(guò)去相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間里，學(xué)者們對(duì)DV感染后凝血系統(tǒng)、血管內(nèi)皮細(xì)胞及炎癥因子變化做了較多的研究，與之相比，肝細(xì)胞損傷機(jī)制所受關(guān)注較少，如能發(fā)現(xiàn)病毒復(fù)制對(duì)肝細(xì)胞哪些方面產(chǎn)生了影響，找到宿主細(xì)胞參與病毒復(fù)制的關(guān)鍵分子，不僅對(duì)DV感染機(jī)制的闡明有重要意義，同時(shí)也為進(jìn)一步研究抗病毒藥物奠定重要的基礎(chǔ)。本研究主要結(jié)果與結(jié)論如下1DV2感染對(duì)HEPG2細(xì)胞內(nèi)外GSH水平的影響感染組加入DV2以MOI10感染HEPG2細(xì)胞，模擬感染組則加入56℃滅活30MIN的病毒液，同等條件置于37℃，以感染起始記為O時(shí)，在感染10MIN、20MIN、30MIN、40MIN、60MIN1H、2H、6H、12H、24H、48H后5個(gè)時(shí)相點(diǎn)吸附后1H，更換病毒維持液時(shí)，分別用PBS充分洗滌細(xì)胞，胰蛋白酶消化，取出細(xì)胞。經(jīng)過(guò)四次快速凍融，離心取上清用于GSH的測(cè)定。取相同數(shù)量的細(xì)胞經(jīng)超聲裂解用于測(cè)定細(xì)胞蛋白濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，病毒感染后10MIN、20MIN、30MIN、40MIN、60MIN1H，HEPG2細(xì)胞內(nèi)GSH水平與模擬感染組比較，呈下降趨勢(shì)，其中以30MIN下降最為明顯，為1682±086NMOLMGN5，與模擬感染組2314±141NMOLMGN5和感染組的其他時(shí)相點(diǎn)比較均有顯著差異P＜001。病毒感染后2H、6H、12H、24H、48H，HEPG2細(xì)胞內(nèi)GSH水平與模擬感染組比較，仍呈下降趨勢(shì)，其中以2H，24H時(shí)下降較為明顯，分別為2951±316NMOLMGN5和1775±332NMOLMGN5，與相應(yīng)時(shí)相點(diǎn)的模擬感染組3545±355NMOLMGN5和2291±415NMOLMGN5以及感染組的其它時(shí)相點(diǎn)比較，差異顯著P＜005，其后逐漸恢復(fù)，到48H時(shí)已與模擬感染組無(wú)顯著差異P＞005。感染后30MIN上清中的GSH含量為4786±300NMOLMLN4，較模擬感染組升高3309％，且有顯著差異P＜005，而模擬感染組與病毒原液則無(wú)顯著差異P＞005。以上結(jié)果說(shuō)明DV2感染能夠使HEPG2細(xì)胞內(nèi)GSH水平下降，改變宿主細(xì)胞的氧化還原狀態(tài)，且呈現(xiàn)階段性變化，推測(cè)可能與病毒的復(fù)制過(guò)程有關(guān)。結(jié)合感染后同一時(shí)相點(diǎn)細(xì)胞外GSH水平的升高和文獻(xiàn)報(bào)道，推測(cè)DV2感染后30MIN細(xì)胞內(nèi)GSH水平的快速降低可能是由于DV2感染所致細(xì)胞膜通透性增加、GSH的外漏引起的。2DV2E蛋白對(duì)宿主細(xì)胞內(nèi)外GSH水平的影響首先構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)E蛋白的HEPG2細(xì)胞株P(guān)REEHEPG2，并且通過(guò)PCR、酶切、核苷酸測(cè)序及間接免疫熒光法進(jìn)行了鑒定和檢測(cè)，確認(rèn)了該細(xì)胞中E蛋白的表達(dá)。同時(shí)構(gòu)建了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的細(xì)胞株P(guān)REEHEPG2作為對(duì)照。然后測(cè)定了PREEHEPG2細(xì)胞內(nèi)外GSH的水平。結(jié)果PREEHEPG2細(xì)胞內(nèi)GSH水平與PREHEPG2細(xì)胞對(duì)照組比較，呈下降趨勢(shì)。PREEHEPG2細(xì)胞內(nèi)GSH平均濃度為2561±223NMOLMGN4，PREHEPG2細(xì)胞內(nèi)的GSH平均濃度為3338±107NMOLMGN4，與PREHEPG2細(xì)胞比較，PREEHEPG2細(xì)胞內(nèi)GSH下降了243％P＜001。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期PREEHEPG2和PREHEPG2細(xì)胞的培養(yǎng)上清05ML測(cè)定GSH濃度，發(fā)現(xiàn)PREEHEPG2細(xì)胞上清中GSH含量平均值為3672±140NMOLMLN4，PREHEPG2細(xì)胞上清中GSH含量平均為5741±200NMOLMLN4，前者相較后者明顯降低，兩者差異顯著P＜005，前者較后者平均下降了3635％。以上結(jié)果表明，穩(wěn)定表達(dá)E蛋白的PREEHEPG2細(xì)胞較穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的PREHEPG2細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)外GSH濃度均下降顯著，提示E蛋白在宿主細(xì)胞中的表達(dá)不僅可以改變細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)，還可以使宿主細(xì)胞外的GSH水平降低，在DV2感染誘使的細(xì)胞氧化還原狀態(tài)變化的過(guò)程中，E蛋白可能起重要作用。3BSO及外源性GSH處理對(duì)DV2感染的影響依據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果并參照文獻(xiàn)，選擇BSO的處理濃度為02MM和1MM，外源性GSH的處理濃度為10MM和20MM。在不感染病毒的情況下，培養(yǎng)上清中加入02MM、1MMBSO處理18H，可使細(xì)胞內(nèi)GSH含量由空白對(duì)照組的2453±259NMOLMGN5分別下降至1429±148NMOLMGN5、1405±193NMOLMGN5P＜005，且兩種濃度下降幅度無(wú)顯著差異P＞005，幅度平均為4224％N5。在DV2感染BSO處理組，感染前18H分別用02MM、1MMBSO預(yù)處理HEPG2細(xì)胞，然后用DV2以MOI1感染HEPG2細(xì)胞，并維持BSO濃度至感染24H，空白對(duì)照組不加藥物處理。感染后24H收取病毒上清，噬斑試驗(yàn)測(cè)定病毒滴度PFUML。結(jié)果發(fā)現(xiàn)02MM與1MMBSO處理組病毒滴度較空白對(duì)照組分別上升了11979％N5和12751％N5，與空白對(duì)照組比較差別顯著P＜005，但兩種濃度BSO處理組的病毒滴度上升幅度無(wú)顯著差異P＞005。在不感染病毒的情況下，培養(yǎng)上清中加入10MM、20MMGSH溶液與空白對(duì)照組相比，細(xì)胞內(nèi)GSH含量均無(wú)顯著差異P＞005；在DV2感染GSH處理組，從感染起始到感染24H維持上清內(nèi)GSH濃度分別為10MM、20MM，空白對(duì)照組不加藥物處理。感染后24H收取病毒上清，測(cè)定病毒滴度PFUML。結(jié)果發(fā)現(xiàn)較空白對(duì)照組而言，10MM與20MMGSH處理組病毒滴度分別下降4024％N5和5662％N5，兩種濃度GSH處理組均與空白對(duì)照組差異顯著P＜005，且20MMGSH處理組病毒滴度下降更為明顯P＜005；以上結(jié)果說(shuō)明不僅DV2可以引起細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)改變，細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)反過(guò)來(lái)也可以影響DV2的復(fù)制和增殖。以上結(jié)果為闡明DV的致病機(jī)理和進(jìn)一步設(shè)計(jì)靶向抗病毒藥物提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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