蜜蜂上顎腺合成10-HDA關鍵酶的研究.pdf

1、10-羥基-2-癸烯酸（簡稱10-HDA）是一種不飽和脂肪酸，它是由蜜蜂上顎腺分泌的，是蜂王漿中的主要生物活性物質，具有免疫調節(jié)、降血脂和抑菌等多種生理功效，廣泛應用于醫(yī)藥保健和化妝產品之中。10-HDA在市場上的需求很大，但在蜂王漿中所占的比例較低，因此實現10-HDA的工業(yè)化生產成為研究者關注的焦點。然而，要實現10-HDA的產業(yè)化，首先要弄清其具體的生物合成機理，但是目前尚不清楚。
　　本文基于前期我們利用蛋白組學的方法鑒定

2、出與10-HDA生物合成相關的酶蛋白電子轉移黃素蛋白β（Electron Transfer Flavoprotein Subunit beta-like，ETF-β，又稱輔酶Q氧化還原酶）和3-酮酯酰CoA硫解酶（3-KetoacyI-CoA Thioase，KAT），以當地馴化后的意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）為蜂群原料，分析ETF-β和K AT基因在工蜂不同組織及不同日齡的表達模式，并在工蜂基礎日糧中

3、添加不同濃度的中長鏈脂肪酸以及在其體內進行ETF-β和KAT RNA干擾，分析ETF-β和KAT與工蜂上顎腺10-HDA合成途徑的關系，探索10-HDA生物合成途徑，為揭示10-HDA生物合成的分子機制奠定基礎。
　　利用半定量RT-PCR技術，檢測ETF-β和KAT的表達水平。結果顯示，ETF-β和KAT基因在蜜蜂上顎腺中能夠高表達，且在不同日齡蜜蜂上顎腺中的表達水平不同，其表達高峰與10-HDA的分泌高峰一致。通過高效液相色譜

4、法，檢測蜜蜂頭部10-HDA的含量。結果顯示在花粉飼料中添加不同濃度的中長鏈脂肪酸在一定程度上都能提高蜜蜂頭部10-HDA的產量，且與空白組相比，5％硬脂酸和1%癸酸的作用效果顯著（P<0.05）。同時，在基礎日糧中添加5%硬脂酸和1%癸酸后，10-HDA的分泌高峰均提前，分別由原來的20日齡提前到15日齡、10日齡，可實現短期內提高10-HDA的產量，這為進一步揭示10-HDA的生物合成機理提供了理論依據，為實現10-HDA的大量生產