hAECs對脂多糖誘導小鼠急性肺損傷的保護作用及其與NF-κBp65的相關性研究.pdf

1、背景：
　　急性肺損傷（acute lung injury，ALI）是一種常見的臨床綜合癥，其特點是頑固性低氧血癥、進行性呼吸困難和非心源性肺水腫等。多種肺內外因素可引起急性肺損傷的發(fā)生，目前認為過度的炎癥反應和抗炎失衡在其中發(fā)揮重要作用，但是具體發(fā)病機制還未完全闡明。臨床上仍以支持治療為主，病死率依然很高。核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）是一組真核細胞轉錄因子，參與多種細胞活動，具有關鍵的生物學功能，

2、尤其是調節(jié)機體的免疫應答和炎癥反應。大量炎癥因子的表達均與NF-κB的活化密切相關?？梢哉fNF-κB在炎癥的發(fā)生發(fā)展中處于關鍵環(huán)節(jié)，因此，抑制了NF-κB就能有效的抗炎，減輕肺損傷。
　　人羊膜上皮細胞（human amnion epithelial cells，hAECs）是羊膜上一層單層立方或柱狀細胞，與羊水直接相接觸。hAECs表達階段特異性胚胎抗原-4（stage-specific embryonic antigen-4，

3、SSEA-4）、SSEA-3、關鍵蛋白（NANOG）和八聚體物結合轉錄因子-4（octamer-binding transcription factor-4，OCT-4）等分子標志物，具有胚胎干細胞特性。hAECs具有向三個胚層組織細胞分化的能力，此外，hAECs不表達或很少表達Ⅰ型和Ⅱ型人類白細胞抗原，而且還表達免疫抑制型的人體白細胞抗原G，從而使hAECs具有很強的免疫豁免能力，在疾病治療方面顯示出很大的潛能。我們通過氣管內給予脂多

4、糖（lipopolysaccharide，LPS）建立小鼠ALI模型，經氣管內滴注hAECs進行治療，探討hAECs對急性肺損傷小鼠模型的治療作用及其可能的機制。
　　目的：
　?。?）明確人羊膜上皮細胞（hAECs）是否對LPS所致急性肺損傷有治療作用。
　　（2）明確人羊膜上皮細胞（hAECs）對NF-κBp65的影響，人羊膜上皮細胞的應用是否能減少NF-κBp65的表達，從而減輕肺損傷的炎癥。
　　方法：健

5、康成年雄性 C57BL/6小鼠隨機分成正常對照組（Control）、hAECs對照組（hAECs）、模型組（LPS）和hAECs治療組（LPS+hAECs），每組10只。模型組（LPS）的小鼠經口咽無創(chuàng)插管緩慢滴注LPS5mg/kg，1h后再注入PBS（50μl）；hAECs治療組（LPS+hAECs）的小鼠經口咽無創(chuàng)插管緩慢滴注LPS5mg/kg，1h后再注入hAECs（1×107/ml，50μl）；hAECs對照組和正常對照組則經口

6、咽插管注入等量hAECs或PBS。經過LPS處理后24h，正常處死小鼠，從心臟處收集血液并收集肺臟組織，右肺部分組織用來計算肺組織濕/干質量（W/D）比值；部分用于檢測肺組織髓過氧化物酶（ MPO）活性；余下肺組織用來提取細胞漿/細胞核蛋白；左肺用于HE染色觀察小鼠肺組織病理學改變；應用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清中IL-6、IL-1β、IL-10及TNF-α含量；Western blot法檢測肺組織核轉錄因子-κBp65（NF

7、-κBp65）蛋白的表達。
　　結果：
　　與正常對照組相比，LPS處理后小鼠肺組織W/D增大，血清中IL-6、IL-1β及TNF-α含量增加(P＜0.05)，而IL-10的含量卻有所減少(P＜0.05)；MPO活性明顯增高；光學顯微鏡下觀察，可見肺組織微血管破壞、肺泡間隔增厚、發(fā)生肺水腫、并有炎性細胞浸潤、肺泡腔內出現(xiàn)滲出的紅細胞，與ALI的病理變化相吻合；上述各項結果都表明經口咽插管滴注LPS誘導小鼠ALI的模型建立成功

8、。應用hAECs后，我們發(fā)現(xiàn)hAECs可以減小LPS導致的肺W/D比值；血清中炎癥因子IL-6、IL-1β及TNF-α含量有一定的降低（P＜0.05），炎癥因子IL-10水平則表現(xiàn)為上升（P＜0.05）；MPO活性降低；病理變化方面，hAECs明顯改善LPS造成的肺組織損傷，肺水腫減輕，炎癥反應減弱；表明hAECs在LPS誘導的ALI中有保護性作用。LPS處理組肺組織細胞漿中NF-κBp65蛋白比對照組中明顯減少（P＜0.05），而其在

9、細胞核中的含量明顯增加（P＜0.05）；LPS+hAECs組肺組織細胞漿中NF-κBp65蛋白比LPS處理組有所增加，而細胞核中的NF-κBp65蛋白含量明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結果提示hAECs在一定程度上抑制了NF-κBp65的核轉位。
　　結論：
　?。?）hAECs可顯著減輕LPS誘導的小鼠急性肺損傷。
　　（2）hAECs減輕急性肺損傷的作用可能與降低肺組織中NF-κBp65的活性，減少炎