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文檔簡介
1、甘露糖受體(MR, CD206)是甘露糖受體家族中最先發(fā)現的成員,它能夠識別多種內源性和外源性甘露糖化配體,在宿主免疫和內環(huán)境穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用。MR胞外有8個C-型凝集素樣結構域(CTLDs),CTLD4-8結構域有同等于完整的MR結合天然糖蛋白配體能力,能介導巨噬細胞對多種病原微生物的識別和吞噬。MR表達并不局限于巨噬細胞,在其他細胞如腎小球系膜細胞、淋巴和肝內皮細胞、視網膜色素上皮細胞、成肌細胞以及腦中的小膠質細胞等都發(fā)現有MR
2、表達。相對于哺乳動物MR的結構、功能以及分布已有的詳盡研究,有關魚類MR的報道卻很少,尤其是MR蛋白的分布,迄今還沒有過報道。本研究從MR的CTLD4-8結構域表達載體的構建、原核表達、蛋白純化等方面入手,進而制備了抗團頭魴MR的多克隆抗體(MaMR-CTLD4-8)。結合免疫組化技術系統研究了MR蛋白在團頭魴胚胎期以及幼魚期各組織的分布,并研究了MR與GFP-E.coli的相互作用,探討其在團頭魴巨噬細胞吞噬病原微生物過程中發(fā)揮的作用
3、,以及引起的免疫應答。主要研究結果如下:
(1)在優(yōu)化條件下,高效表達CTLD4-8重組蛋白。經SDS-PAGE和Western-blot鑒定,證明成功表達了分子量大小為110kDa的融合蛋白;
(2)純化目的蛋白免疫日本大耳白兔三次,制備了多克隆抗體。ELISA檢測抗血清效價在51,200左右。以提取的團頭魴組織總蛋白作為蛋白樣品,經Western-blot分析,在PVDF膜上檢測出單一條帶,分子量在170~180
4、kDa,與預測的MR大小相符。說明制備的多克隆抗體具有特異性,可用于下面的研究;
(3)利用免疫組化技術研究了MR蛋白在團頭魴胚胎期及幼魚各組織中的分布。結果表明MR首先出現在受精卵期的卵黃囊處,在出膜期分布廣泛。MR蛋白分布與早期巨噬細胞時空分布有一定關聯性,預測早期巨噬細胞就開始表達MR,而不是局限于終端分化巨噬細胞。MR廣泛表達于團頭魴頭腎、體腎、肝、腦、腸、鰓、肌肉和心臟等組織,而在脾中的表達很少,但是嗜水氣單胞菌感染
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