團頭魴甘露糖受體CTLD4-8結構域抗體制備及功能分析.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩69頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、甘露糖受體(MR, CD206)是甘露糖受體家族中最先發(fā)現的成員,它能夠識別多種內源性和外源性甘露糖化配體,在宿主免疫和內環(huán)境穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用。MR胞外有8個C-型凝集素樣結構域(CTLDs),CTLD4-8結構域有同等于完整的MR結合天然糖蛋白配體能力,能介導巨噬細胞對多種病原微生物的識別和吞噬。MR表達并不局限于巨噬細胞,在其他細胞如腎小球系膜細胞、淋巴和肝內皮細胞、視網膜色素上皮細胞、成肌細胞以及腦中的小膠質細胞等都發(fā)現有MR

2、表達。相對于哺乳動物MR的結構、功能以及分布已有的詳盡研究,有關魚類MR的報道卻很少,尤其是MR蛋白的分布,迄今還沒有過報道。本研究從MR的CTLD4-8結構域表達載體的構建、原核表達、蛋白純化等方面入手,進而制備了抗團頭魴MR的多克隆抗體(MaMR-CTLD4-8)。結合免疫組化技術系統研究了MR蛋白在團頭魴胚胎期以及幼魚期各組織的分布,并研究了MR與GFP-E.coli的相互作用,探討其在團頭魴巨噬細胞吞噬病原微生物過程中發(fā)揮的作用

3、,以及引起的免疫應答。主要研究結果如下:
  (1)在優(yōu)化條件下,高效表達CTLD4-8重組蛋白。經SDS-PAGE和Western-blot鑒定,證明成功表達了分子量大小為110kDa的融合蛋白;
  (2)純化目的蛋白免疫日本大耳白兔三次,制備了多克隆抗體。ELISA檢測抗血清效價在51,200左右。以提取的團頭魴組織總蛋白作為蛋白樣品,經Western-blot分析,在PVDF膜上檢測出單一條帶,分子量在170~180

4、kDa,與預測的MR大小相符。說明制備的多克隆抗體具有特異性,可用于下面的研究;
  (3)利用免疫組化技術研究了MR蛋白在團頭魴胚胎期及幼魚各組織中的分布。結果表明MR首先出現在受精卵期的卵黃囊處,在出膜期分布廣泛。MR蛋白分布與早期巨噬細胞時空分布有一定關聯性,預測早期巨噬細胞就開始表達MR,而不是局限于終端分化巨噬細胞。MR廣泛表達于團頭魴頭腎、體腎、肝、腦、腸、鰓、肌肉和心臟等組織,而在脾中的表達很少,但是嗜水氣單胞菌感染

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論