四季桔試管苗離體保存過程的超微結構觀察和鈣分布變化研究.pdf

1、本研究以四季桔成熟胚為外植體,建立四季桔離體再生體系,并進行長期不繼代保存試管苗研究;同時,對保存各個階段的試管苗進行葉片超薄切片及透射電鏡的超微結構觀察與鈣分布變化研究,試圖從微觀的角度探討四季桔試管苗長期保存機制。主要研究結果如下:
　　 1四季桔試管苗離體繁殖體系的建立
　　 以四季桔試管苗為材料誘導不定芽,建立了離體繁殖體系。并研究了取材部位、MS鹽濃度、糖濃度、不同激素組合及其配比和光照等因素對不定芽誘導的影響

2、。結果表明:以上胚軸為材料,形態(tài)學下端插入MS+6-BA1mg-1+NAA0.1mg·L-1培養(yǎng)基中,暗培養(yǎng)兩周后再在光照下培養(yǎng),不定芽誘導率最高,出芽率可達85.6％。一定時間的暗培養(yǎng)有助于外植體切口的愈傷組織快速形成,提高不定芽的發(fā)生率,而高濃度的6-BA和NAA對不定芽的誘導起抑制作用。不定芽增殖最佳培養(yǎng)基為1/2MS+1.0mg·L-1 BA+0.2mg·L-1KT,增殖系數達到7.29。生根最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+0.2 m

3、g·L-1 IAA+0.5mg·L-1 IBA,生根率為77.8％。
　　 2四季桔試管苗長期不繼代離體保存研究
　　 以成熟珠心胚誘導的試管苗來保存四季桔種質資源。本試驗采用在MS空白培養(yǎng)上保存四季桔試管苗的方法,待培養(yǎng)基接近完全失水時,往瓶中添加3gL-1瓊脂的半液體MS空白培養(yǎng)基。試驗結果表明,四季桔試管苗無需添加生長調節(jié)劑就能長期保存,保存最長時間已達3年。保存1年的試管苗成活率為88.9％,保存2年存活率為73

4、.3％,保存3年時存活率為44.4％。
　　 3四季桔試管苗種質保存過程中超微結構觀察
　　 以四季桔珠心胚培養(yǎng)的試管苗為材料,取其葉片,并按保存時間的長短分為保存一個月、保存一年、兩年、三年4個階段,對各個時期的超微結構進行觀察和比較。研究結果表明:細胞衰老速度緩慢,保存前兩年未見葉綠體的明顯衰老特征,到第三年時才觀察到部分葉綠體外膜開始向外擴張,破裂。葉肉細胞衰老速度緩慢從微觀的角度為四季桔試管苗長期保存提供了證據。

5、
　　 4四季桔試管苗種質保存過程中鈣分布變化研究
　　 細胞內Ca2+濃度與分布區(qū)域和植物衰老有一定的相關性,通過觀察細胞中ca2+水平的變化可以反映出植物細胞的衰老情況。本試驗按保存一個月、保存一年、兩年、三年4個階段,對各個時期葉片的鈣分布變化進行觀察研究。研究結果表明,隨著保存時間的增加,Ca2+從細胞液泡中轉移到細胞質、核質、細胞間隙中,細胞自身能調節(jié)Ca2+濃度,使其Ca2+濃度維持在一個較低水平,延緩其衰老