1140.固定化胰蛋白酶的微波法高效制備及其性質研究

1、分類號：學校代碼：10069密級：研究生學號：120140191固定化胰蛋白酶的微波法高效制備及其性質研究固定化胰蛋白酶的微波法高效制備及其性質研究ResearchesonHighefficientPreparationbyMicrowaveMethodacterizationofImmobilizedTrypsin研究生姓名：劉偉華專業(yè)名稱：食品科學指導教師姓名：姜子濤教授論文提交日期：2017年5月學位授予單位：天津商業(yè)大學I摘要固

2、定化酶技術是20世紀60年代發(fā)展起來的一種為克服游離酶穩(wěn)定性能差、成本高、產物純度低等缺點而應運而生的一種技術，固定化酶已在許多領域顯示出重要的應用價值。但是固定化酶的制備過程通常耗時較長，少則幾個小時，多則幾十個小時?，F今，隨著科學技術的發(fā)展，人們對生活質量的要求越來越高，費時、繁雜的方式和方法不斷被淘汰，快速測定技術迅猛發(fā)展，人們的生產生活方式越來越快捷。因此探索高效制備固定化酶的方法，以滿足生產、應用的需求是必要的。近年來，微波作

3、為一種高效的輔助手段被廣泛地應用到科研之中。但目前為止，國內外對微波輔助固定化酶的研究相對較少，且還沒有對胰蛋白酶進行微波固定化的研究。因此本課題采用微波固定化的方法來制備固定化胰蛋白酶。本課題研究包括以下四個部分：（1）以ES105環(huán)氧基樹脂為固定化胰蛋白酶的載體，在微波輔助的條件下，對胰蛋白酶進行固定化，應用BoxBehnken響應面法設計實驗，優(yōu)化確定了最佳的固定化條件。結果表明，在加酶量為41mgg、pH值6.2、微波溫度為30

4、℃、微波時間10min的條件下，制備的固定化胰蛋白酶的活力為322.6Ug。此酶在25℃~40℃的溫度范圍內、5~7和9~10的pH值范圍內穩(wěn)定性較好，經過9次使用后還可以保持63.2%的初始酶活力，在4℃環(huán)境下貯藏五周后仍能保持初始酶活力的64.6%。（2）以ESR5伯氨基樹脂為固定化載體，在微波輔助的條件下，以戊二醛為交聯劑制備固定化胰蛋白酶。應用BoxBehnken響應面法設計實驗，優(yōu)化確定了最佳的固定化條件。結果表明，在加酶量為

5、26mgg、戊二醛質量分數為0.53%、pH值為9.1，微波溫度為35℃、微波時間為5min的條件下，制得的固定化胰蛋白酶的活力為390.8Ug。此酶在25℃~45℃的溫度范圍內、在8.5~10.0的pH值范圍內酶的穩(wěn)定性較好，經過11次使用后還可以保持86.7%的初始酶活力，在4℃環(huán)境下貯藏五周后仍能保持初始酶活力的63.7%。（3）以D151大孔樹脂為固定化載體，在微波輔助的條件下，采用吸附交聯法制備固定化胰蛋白酶。采用星點設計響應