16002.精氨酸親和色譜分離純化超螺旋質粒dna

1、精氨酸親和色譜分離純化超螺旋質粒精氨酸親和色譜分離純化超螺旋質粒DNAPurificationofsupercoiledplasDNAbyarginineaffinitychromatography學科專業(yè)：生物化工研究生：白金山指導教師：白姝副教授天津大學化工學院二零一三年六月摘要與病毒載體相比，質粒DNA具有安全性好、毒性和免疫原性較低以及易于生產(chǎn)等諸多優(yōu)勢，在臨床上已被廣泛用于基因治療和DNA疫苗。氨基酸親和色譜是利用小分子氨基酸

2、作為親和配基，基于氨基酸和超螺旋質粒DNA之間的特異性相互作用進行質粒純化的色譜方法，具有操作簡便、成本低廉等優(yōu)勢。有研究表明，精氨酸親和色譜對超螺旋質粒DNA具有很好的選擇性，且色譜純化的條件溫和、操作簡便。本研究以精氨酸作為親和配基，考察了介質性能（間隔臂長度，配基密度）和操作條件對質粒DNA吸附量和純化效果的影響。首先，以瓊脂糖凝膠SepharoseCL6B作為基質，利用環(huán)氧氯丙烷和14丁二醇二縮水甘油醚進行活化，得到不同間隔臂長

3、度和活化密度的環(huán)氧基團，并進行精氨酸配基的固定化。實驗結果表明，不同間隔臂長度的精氨酸親和介質中配基密度分別為21.8mmolLgel（3carbon）和21.2mmolLgel（10carbon）。同時，以14丁二醇二縮水甘油醚作為間隔臂活化介質得到配基密度分別為9.6、28.5和47.4mmolLgel的精氨酸親和介質。然后，采用迎頭分析的方法，考察不同間隔臂長度和配基密度對質粒DNA動態(tài)吸附容量的影響。研究發(fā)現(xiàn)，配基和載體之間的間

4、隔臂越長質粒DNA的動態(tài)吸附容量越大，質粒DNA的動態(tài)吸附容量隨配基密度升高而增大，在配基密度為47.4mmolLgel時，質粒DNA的吸附容量最大為6.32mgmLgel。最后，利用精氨酸親和色譜從E.coli細胞裂解液中直接分離純化超螺旋質粒DNA，優(yōu)化了質粒DNA吸附和洗脫的條件，并詳細討論了上樣量和配基密度對質粒DNA純化效果的影響。結果表明，所得質粒樣品的純度和收率隨上樣量的增加而降低，質粒的收率隨配基密度的增加而增大。利用R