ET-1和CGRP對大鼠血管平滑肌細胞表型轉化和增殖的影響.pdf

1、第一部分內皮素-1對大鼠血管平滑肌細胞表型轉化和增殖的影響及機制研究研究 目的：通過ET-1作用于大鼠VSMC及對ET-1受體信號的阻斷，探討ET-1對VSMC表型轉化和增殖的影響及機制。 研究方法：體外培養(yǎng)大鼠主動脈VSMC，實驗取第4～5代細胞。 實驗一，實驗分為：A<,1>：對照組、B<,1>：ET-1組、C<,1>：ET-1+BQ123．組。用無血清DMEM培養(yǎng)液同步化處理24h后，各組細胞加入相應藥物(

2、ET-1，10<'-7>mol/L：BQ123，10<'-6>mol/L)，作用48h后收集細胞，用5．BrDU標記細胞增殖情況；RT-PCR檢測’VSMC增殖負性調控基因HRG-1和表型標志基因SM22a的表達。 實驗二，實驗分為：A<,2>：有血清培養(yǎng)72h組；B<,2>：無血清對照組；C<,2>：ET-1組；D2：ET-1+BQ123組。用無血清DMEM培養(yǎng)液同步化處理24h后，各組細胞換用含10％NCS的DMEM繼續(xù)培養(yǎng)

3、72h，此時A<,2>組終止培養(yǎng)收集細胞，其余各組換成無血清培養(yǎng)液并分別加入相應藥物(ET-1，10<'-7>mol/L；BQ123，10<'-6>mol/L)作用48h，收集細胞，RT-PCR檢測HRG-1和SM22a mRNA的表達。 結果：實驗一：免疫細胞化學檢測，ET-1作用組可見大量增殖的VSMC，而加入ET-1受體阻斷劑BQ123后標記的增殖細胞顯著減少。RT-PCR檢測中，ET-1組HRG-1和SM22a mRNA

4、表達較對照組有明顯下調，而加入阻斷劑BQ123可拮抗這一作用。實驗二： RT-PCR檢測進一步證實BQ123有阻斷ET-1下調VSMC HRG-1和SM22a兩個基因表達的作用。 結論：1．ET-1對收縮型VSMC有明顯的促增殖作用，并可使VSMC表型從收縮型向合成型轉化；2．ET-1對合成型VSMC同樣有促表型轉化和增殖的作用，表明ET--1對VSMC的作用是一種不可逆的因素。3．受體信號途徑是ET-1促VSMC表型轉化和增殖

5、的作用機制之一。 第二部分內皮素-1與CGRP共作用對血管平滑肌細胞表型轉化和增殖的影響研究 目的：通過ET-1與降鈣素基因相關肽(CGRF),共同作用于VSMC，研究CGRP抑制ET-1促VSMC表型轉化和增殖的作用及機制。研究方法：體外培養(yǎng)大鼠主動脈VSMC，實驗取第4～5代細胞。 實驗一，實驗分為： a<,1>：對照組；b<,1>：ET-1組；c<,1>: ET-1+CGRP組(ET-1作用24h后，再加C

6、GRP)；d<,1>：CGRP+ET-1組(CGRP作用24h后，再加ET-1)。無血清DMEM培養(yǎng)液同步化處理24h后，各組細胞加入相應藥物(ET-110<'-7>mol/L；CGRP，2x10<'-7>mol／L)，作用48h后收集細胞，用5-BrDU標記細胞增殖情況，RT-PCR檢測HRG-1和SM22a mRNA的表達。 實驗二，試驗分為：a<,2>：血清培養(yǎng)72h組；b<,2>：無血清對照組；C<,2>： ET-1組；

7、d<,2>：ET-1+CGRP組(ET-1作用24h后，再加CGRP)；e<,2>：CGRP+ET-1組(CGRP作用24h后，再加ET-1)。無血清DMEM培養(yǎng)液同步化處理24h后，各組細胞換用含10％NCS的DMEM繼續(xù)培養(yǎng)72h，此時a<,2>組終止培養(yǎng)收集細胞，其余各組換成無血清培養(yǎng)液并分別加入相應藥物(ET-1 10<'-7>mol/L；CGRP，2x 10<'-7>mol/L)作用48h，收集細胞，RT-PCR檢測HRG-1

8、和SM22a mRNA的表達。 結果：實驗一：免疫細胞化學檢測，ET-1組有大量標記的平滑肌增殖細胞，加入CGRP后增殖細胞稍微有所減少，而先加CGRP作用組中增殖細胞數(shù)量大大減少。RT-PCR檢測中，ET-1組較對照組VSMC HRG-1和SM22a基因表達顯著下調：加入CGRP兩基因表達有所上調，但不明顯；而現(xiàn)加CGRP作用組中兩種基因表達上調明顯。實驗二：RT-PCR檢測進一步證明，CGRP可阻斷ET-1下調VSMC HR