

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、干細(xì)胞是一類具有自我更新和多向分化潛能的未分化細(xì)胞,按來源分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。成體干細(xì)胞因具有來源廣泛、可塑性強、無排斥反應(yīng)等優(yōu)勢成為近年來研究的熱點之一。目前已經(jīng)在機體幾乎所有組織中發(fā)現(xiàn)了成體干細(xì)胞。這些成體干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)不僅為機體損傷修復(fù)機理研究提供了新的研究平臺,而且將通過干細(xì)胞移植或構(gòu)建人工組織器官在人類多種疾病治療史上產(chǎn)生劃時代的影響。 牙周膜干細(xì)胞屬于成體干細(xì)胞,2004年由Byoung首次提出,并且證實了其在
2、一定條件下能形成牙周膜牙骨質(zhì)樣復(fù)合體,這將為其組織工程化研究提供理論依據(jù)和可靠的細(xì)胞來源。目前對人牙周膜干細(xì)胞的研究尚處于起始階段,在國內(nèi)還未見人牙周膜干細(xì)胞培養(yǎng)成功的報道。 本研究采用克隆化培養(yǎng),免疫磁珠法分離純化人牙周膜細(xì)胞,并通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性及免疫細(xì)胞化學(xué)法對分離純化的人牙周膜細(xì)胞進行了初步鑒定,并在此基礎(chǔ)上,成功的對分離出的人牙周膜干細(xì)胞進行了體外誘導(dǎo)分化實驗,為后期研究牙周膜牙骨質(zhì)復(fù)合體的人工生物器官的構(gòu)建和
3、牙周膜再生治療提供了重要的理論和依據(jù)。 目的 研究牙周膜干細(xì)胞的生物學(xué)特性,為后期研究牙周組織工程的生物器官的構(gòu)建和牙周膜再生治療提供理論基礎(chǔ)。分離純化人牙周膜細(xì)胞,初步了解純化后人牙周膜細(xì)胞特性,通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性及免疫細(xì)胞化學(xué)法對分離純化的細(xì)胞進行初步鑒定,并在此基礎(chǔ)上,探討其分化的細(xì)胞學(xué)機理,進一步認(rèn)識其生物學(xué)特性,為后期研究牙周膜牙骨質(zhì)復(fù)合體的人工生物器官的構(gòu)建和牙周膜再生治療提供重要的理論依據(jù)。
4、 方法 1、分離純化人牙周膜細(xì)胞收集臨床因正畸需要拔除的年輕恒牙,刮下其牙周膜組織,運用酶消化法獲得牙周膜細(xì)胞,采用克隆化培養(yǎng),免疫磁珠法分離純化獲得純化后的牙周膜細(xì)胞,并對其進行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、描繪細(xì)胞生長曲線。 2、純化后的人牙周膜細(xì)胞的初步鑒定運用透射電鏡、流式細(xì)胞儀,觀察和研究細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)和細(xì)胞周期特點,通過免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測純化后牙周膜細(xì)胞表面相對特異性蛋白的表達(dá),對細(xì)胞進行初步鑒定。 3、人牙周膜干
5、細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化的實驗研究分別對所獲得的細(xì)胞進行成骨、成神經(jīng)細(xì)胞樣的誘導(dǎo)分化,并對其進行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察,通過免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測誘導(dǎo)后細(xì)胞表面相對特異性蛋白的表達(dá),對誘導(dǎo)后的細(xì)胞進行鑒定。 結(jié)果 1、分離純化人牙周膜細(xì)胞及其生物學(xué)特性:采用克隆化培養(yǎng)方法和免疫磁珠法對人牙周膜細(xì)胞進行分離純化,獲得的細(xì)胞為成纖維細(xì)胞形態(tài);通過細(xì)胞生長曲線測定,可見篩選純化的牙周膜細(xì)胞較未篩選純化的牙周膜混合細(xì)胞生長慢,具有慢增殖周期的干細(xì)
6、胞特點。 2、純化后的人牙周膜細(xì)胞的初步鑒定:將篩選分離的牙周膜細(xì)胞通過透射電鏡和流式細(xì)胞儀分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)所分離的細(xì)胞具有干細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)和細(xì)胞周期特點,通過免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測該細(xì)胞表面相對特異性蛋白的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)表達(dá)間充質(zhì)來源細(xì)胞標(biāo)志、未分化的間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志、礦化基質(zhì)形成細(xì)胞標(biāo)志。提示所分離的細(xì)胞是間充質(zhì)來源的、未分化的、有礦化基質(zhì)形成潛能的細(xì)胞。 3、人牙周膜干細(xì)胞的礦化誘導(dǎo)實驗:將該細(xì)胞礦化誘導(dǎo)14d后,細(xì)胞形態(tài)
7、明顯發(fā)生極化;15d左右孔板底部出現(xiàn)肉眼可見針尖大小灰白色小結(jié)節(jié),并逐漸增大,Vonkossa染色可見染成褐紅色的礦化結(jié)節(jié),周邊界限不清。有礦化相關(guān)蛋白ON、BSP的表達(dá);表明細(xì)胞礦化誘導(dǎo)后出現(xiàn)向成骨細(xì)胞分化。 4、人牙周膜干細(xì)胞的神經(jīng)誘導(dǎo)分化實驗:將所獲得的細(xì)胞向神經(jīng)方向做定向誘導(dǎo),結(jié)果誘導(dǎo)4h后出現(xiàn)向神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,并表達(dá)神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白NSE、GFAP的表達(dá)。提示誘導(dǎo)的細(xì)胞分化為神經(jīng)元、神經(jīng)
8、膠質(zhì)樣細(xì)胞。 結(jié)論 1、克隆化培養(yǎng)和免疫磁珠分離可獲得PDLSC,具有一定的成骨/成牙骨質(zhì)細(xì)胞特性。 2、實驗所獲得的細(xì)胞具有成體干細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞周期動力學(xué)特點,是間充質(zhì)來源的、未分化的、有礦化基質(zhì)形成潛能的細(xì)胞。 3、PDLSC在礦化液的誘導(dǎo)作用下出現(xiàn)向成骨、成牙骨質(zhì)細(xì)胞的分化。 4、PDLSC在一定條件下可向神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞分化。 5、可嘗試將PDLSC作為種子細(xì)胞,用于牙
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 牙髓干細(xì)胞分離培養(yǎng)鑒定和體外誘導(dǎo)分化的研究.pdf
- 人牙髓干細(xì)胞體外培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化的實驗研究.pdf
- 人脂肪干細(xì)胞的分離、鑒定及體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的實驗研究.pdf
- 表皮干細(xì)胞分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)人表皮細(xì)胞向表皮干細(xì)胞逆向分化的實驗研究.pdf
- 人胎兒間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化為類肝細(xì)胞的實驗研究.pdf
- 大鼠表皮干細(xì)胞的鑒定、分離和體外培養(yǎng).pdf
- 兔脂肪干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化的實驗研究.pdf
- 胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定和HGF體外誘導(dǎo)分化的研究.pdf
- 人表皮干細(xì)胞的體外分離和培養(yǎng).pdf
- 胚胎干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞的實驗研究.pdf
- 豬精原干細(xì)胞分離培養(yǎng)鑒定及誘導(dǎo)分化的研究.pdf
- 綿羊胚胎干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定及誘導(dǎo)分化的研究.pdf
- 小鼠胚芽干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和向肝細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的實驗研究.pdf
- 人胚胎視網(wǎng)膜干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化.pdf
- 鼠胎肝干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)及體內(nèi)移植的實驗性研究.pdf
- 豬胚胎干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定和分化的研究.pdf
- 蒙古羊間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及體外誘導(dǎo)分化.pdf
- 人胚胎干細(xì)胞的分離、體外培養(yǎng)及初步鑒定.pdf
- 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)工藝優(yōu)化及體外誘導(dǎo)分化.pdf
- 體外誘導(dǎo)人脂肪干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化的實驗研究.pdf
評論
0/150
提交評論