非小細(xì)胞肺癌組織中EGFR基因突變及信號(hào)傳導(dǎo)蛋白AKT、ERK磷酸化的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：
　　 檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌組織中表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal GrowthFactor Receptor,EGFR)突變和EGFR下游關(guān)鍵蛋白絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(蛋白激酶B)(protein kinase B,PKB,AKT)及磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(phospho-extracellular signal-regulated kinase,ERK)磷酸化表達(dá),研究上述變化與性別、年齡、吸煙及預(yù)后等臨床因素之間

2、的關(guān)系。為非小細(xì)胞肺癌個(gè)體化靶向治療的研究提供新的依據(jù)。
　　 方法：
　　 (1)收集湘雅醫(yī)院2003年9月至2010年7月間手術(shù)切除并經(jīng)病理確診的原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌(Non-Small Cell Lung Carcinoma,NSCLC)病例103例,冰凍和福爾馬林分別保存活檢組織。所有入選患者術(shù)前均未接受過(guò)化療或放療等任何抗腫瘤治療。
　　 (2)收集所有患者的臨床病理資料,并對(duì)患者進(jìn)行電話(huà)或通信隨訪(fǎng),獲得

3、隨訪(fǎng)資料。
　　 (3)將標(biāo)本解凍后對(duì)所有的腫瘤組織用PCR-直接測(cè)序法(PCRand direct sequencing method)檢測(cè)肺癌組織中EGFR基因第19和21外顯子突變:免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry,IHC)鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法(streptavidin-peroxidase,S-P)檢測(cè)肺癌組織中的p-AKT、p-ERK蛋白表達(dá)。
　　 (4)對(duì)病例資料、

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、生存分析應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 (1)EGFR基因突變情況:PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果顯示突變的腫瘤組織DNA中可同時(shí)檢測(cè)出突變序列和野生型序列。103例NSCLC患者腫瘤組織中共有34例存在EGFR基因突變。其中,19號(hào)外顯子突變有4種突變類(lèi)型均為缺失突變,突變數(shù)為24例。第21號(hào)外顯子突變均為第2573位點(diǎn)突變(L858R),突變數(shù)為10例。

5、在性別、年齡、原發(fā)病灶、區(qū)域淋巴結(jié)分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和國(guó)際分期中不同的病例組中EGFR基因突變的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在不同的吸煙史及病理學(xué)類(lèi)型的病例的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (2)EGFR下游信號(hào)傳導(dǎo)蛋白AKT磷酸化的表達(dá)結(jié)果:p-AKT表達(dá)總陽(yáng)性率為56.3％,EGFR突變患者中p-AKT陽(yáng)性率(44.8％)顯著高于無(wú)突變者的陽(yáng)性率(17.8％),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在性別、

6、年齡、原發(fā)病灶、區(qū)域淋巴結(jié)分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和國(guó)際分期病例中不同的病例中p-AKT的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在不同的吸煙史及病理學(xué)類(lèi)型的病例的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (3)EGFR下游信號(hào)傳導(dǎo)蛋白ERK磷酸化的表達(dá)結(jié)果:p-ERK的表達(dá)陽(yáng)性率為30.1％,在不同的性別、吸煙史、原發(fā)病灶和國(guó)際分期病例中p-ERK的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在年齡、區(qū)域淋巴結(jié)分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及病理學(xué)類(lèi)型

7、不同的病例中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (4)EGFR基因突變和AKT、ERK磷酸化的表達(dá)不同的患者總生存(Overall survival,OS)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.非小細(xì)胞肺癌組織中存在EGFR基因突變,并且信號(hào)傳導(dǎo)通路下游關(guān)鍵分子AKT及ERK磷酸化呈高表達(dá)。
　　 2.吸煙可能使EGFR的19和21位點(diǎn)的基因突變率降低和EGFR的下游關(guān)