ASK1介導的MAPK信號轉導通路在脊髓缺血再灌注中作用的基礎研究.pdf

1、目的： 研究細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1，ASK1)介導的絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信號轉導通路在脊髓缺血再灌注損傷中的作用，并從分子水平初步探討脊髓缺血再灌注中ASK1的活化機制。 方法： 20只新西蘭大白兔隨機分為對照組、缺血30分鐘/再灌注15分鐘組、缺血30分鐘/再灌注

2、1小時組、缺血30分鐘/再灌注24小時組，應用腹主動脈阻斷法制作兔脊髓缺血再灌注損傷模型。光學顯微鏡及電子顯微鏡觀察脊髓形態(tài)學變化；Western blot檢測脊髓蛋白中細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1，ASK1)、c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase，JNK)、p38的表達及活化；免疫共沉淀法(immunoprecipitation，IP)

3、分析ASK1與14-3-3蛋白間的結合與分離：免疫組織化學染色(immunohistochemistry)法測定活化的ASK1(phospho-ASK1，pASK1)及14-3-3在神經(jīng)細胞內(nèi)的定位表達。 結果： 與對照組相比，HE染色顯示缺血30分鐘/再灌注15分鐘脊髓組織、神經(jīng)細胞無明顯異常，而缺血30分鐘/再灌注1小時及24小時脊髓間質片狀出血，神經(jīng)細胞明顯腫脹；電子顯微鏡觀察顯示對照組及缺血30分鐘/再灌注15分

4、鐘神經(jīng)細胞形態(tài)正常，而缺血30分鐘/再灌注1小時及24小時神經(jīng)細胞核濃縮、染色質聚邊、髓質脫髓鞘；Western blot顯示ASK1及其下游蛋白JNK、p38在脊髓缺血30分鐘/再灌注1小時及再灌注24小時實驗組顯著活化；免疫共沉淀顯示ASK1活化時，14-33與ASK1發(fā)生蛋白分離；免疫組織化學染色提示脊髓缺血再灌注時，pAsK1及14-3-3在神經(jīng)細胞漿內(nèi)的定位發(fā)生改變，兩者存在分離現(xiàn)象。 結論： 通過ASK1介導