通心絡抑制缺氧誘導的巨噬細胞增殖及其分子機制.pdf

1、目的:巨噬細胞是機體對病原體入侵做出防御的關鍵細胞，它參與炎癥的發(fā)生和消除雙重作用。當炎癥發(fā)生時，巨噬細胞分泌促炎細胞因子及iNOS等生物活性物質介導炎癥反應。研究發(fā)現，缺氧能夠顯著影響巨噬細胞的炎癥應答和生物學功能，參與多種疾病如感染，慢性炎癥和缺血的發(fā)生發(fā)展過程。
　　通心絡屬中國傳統(tǒng)中草藥，在臨床上廣泛用于治療各種心血管疾病，如動脈粥樣硬化、心肌缺血、中風等，具有益氣活血、通絡止痛之功效，新近研究發(fā)現具有抑制炎癥反應的作用。

2、
　　本實驗通過體內、外實驗觀察通心絡對缺氧誘導的巨噬細胞增殖的影響，發(fā)現缺氧可以顯著誘導巨噬細胞缺氧誘導因子和炎癥相關基因的表達，通心絡可以通過下調上述基因的表達抑制巨噬細胞的增殖，減輕缺氧所致的炎癥反應。
　　方法:用氯化鈷刺激RAW264.7細胞，建立化學誘導的巨噬細胞缺氧模型;用Real Time PCR和Western blot檢測RAW264.7細胞HIF-1α、TLR-4、iNOS、NF-κB的mRNA和蛋白表

3、達;MTS法檢測巨噬細胞增殖情況;建立慢性和急性缺氧小鼠模型，免疫組織化學染色法檢測肺組織中HIF-1α、TLR-4、iNOS、NF-κB表達情況，記錄急性缺氧小鼠存活時間和呼吸頻率。
　　結果:
　　1.氯化鈷促進RAW264.7細胞增殖為了研究缺氧對巨噬細胞生物學行為的影響，我們以RAW264.7細胞為研究對象，以氯化鈷作為缺氧誘導因素，觀察缺氧對巨噬細胞增殖的影響。MTS結果顯示，缺氧可以誘導RAW264.7細胞增殖，

4、濃度100μM時促增殖效果最明顯。
　　2.氯化鈷誘導HIF-1α、TLR-4、iNOS、NF-κB表達為了進一步研究缺氧促進巨噬細胞增殖的分子機制，我們進一步觀察了缺氧誘導的HIF-1α和炎癥相關基因的表達。Western blot和RT-PCR結果顯示，與對照組相比，氯化鈷可以顯著誘導缺氧誘導因子HIF-1α和炎癥相關基因TLR-4、iNOS、NF-κB的表達。
　　3.通心絡抑制氯化鈷誘導的RAW264.7細胞增殖為了

5、研究通心絡對氯化鈷誘導的RAW264.7細胞增殖是否具有抑制作用，分別用不同濃度通心絡預孵育RAW264.7細胞后加入氯化鈷，MTS實驗觀察通心絡對巨噬細胞增殖的影響。結果顯示，通心絡可以濃度依賴性的抑制氯化鈷誘導的RAW264.7細胞增殖。
　　4.通心絡抑制氯化鈷誘導的HIF-1α、TLR-4、iNOS和NF-κB的表達為了進一步探討通心絡抑制缺氧誘導的巨噬細胞增殖的分子機制，我們分別采用RT-PCR和Western Blot

6、檢測缺氧誘導因子HIF-1α和炎癥相關因子TLR-4、iNOS、NF-κB的表達，結果顯示，缺氧顯著誘導上述指標mRNA和蛋白的表達，通心絡預孵育明顯抑制缺氧誘導的上述基因表達。
　　5.通心絡抑制慢性缺氧小鼠HIF-1α、TLR-4、iNOS和NF-κB的表達。
　　為了進一步在整體動物水平上驗證通心絡通過抑制炎癥信號通路逆轉缺氧誘導的巨噬細胞增殖，我們構建了慢性缺氧和急性缺氧小鼠動物模型，收集各組肺組織樣本。免疫組化結果

7、顯示，慢性缺氧組小鼠HIF-1α、TLR-4、iNOS、NF-κB蛋白表達明顯增多;通心絡抑制缺氧小鼠肺組織上述蛋白的表達。但是，通心絡不改善急性缺氧老鼠的存活時間以及蛋白的表達。
　　結論:
　　1.氯化鈷促進RAW264.7細胞增殖。
　　2.氯化鈷誘導RAW264.7細胞炎性相關基因的表達。
　　3.通心絡抑制氯化鈷誘導的RAW264.7細胞增殖。
　　4.通心絡抑制氯化鈷誘導的RAW264.7細胞炎