21-三體、性染色體非整倍體病產(chǎn)前診斷的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文21三體、性染色體非整倍體病產(chǎn)前診斷的研究姓名：江帆申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：人體解剖學(xué)和組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：何蘊(yùn)韶2006050121三體、性染色體非整倍體病產(chǎn)前診斷的研究要價(jià)值。此方法以QF—PCR(定量熒JtPCR)、FISH(Fluorescenceinsituhybridization，熒光原位雜交)較為常見(jiàn)，其中QF—PCR具有傳統(tǒng)PCR的一切優(yōu)點(diǎn)，靈敏度高、特異性強(qiáng)，與染色體核型分析技術(shù)相比，操作自動(dòng)化、

2、耗時(shí)短，適于高通量檢測(cè)。它甚至可以對(duì)單細(xì)胞單基因缺陷進(jìn)行檢測(cè)，這使得該方法在PGD(Pre—ImplantationGeneticDiagnosis，植入前胚胎診斷)領(lǐng)域具有較好的應(yīng)用前景。率試驗(yàn)研究EI的是應(yīng)用定量熒光PCR(QuantitativeFluorescence。PCR)和染色體核型分析的方法檢測(cè)21三體和性染色體異常疾病，通過(guò)與核型分析診斷結(jié)果的比較，對(duì)QF—PCR方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，希望通過(guò)對(duì)多重定量熒光PCR體系的優(yōu)化，建

3、立一種快速簡(jiǎn)便的21三體、性染色體異常疾病的產(chǎn)前診斷方法。材料和方法1研究對(duì)象本實(shí)驗(yàn)自2005年3月2006年5月共收集T320t，OPb周血標(biāo)本，每次將所收集的外周血標(biāo)本分成兩份，一份取外周血250400ul，分裝于0lml的離心管中flj于DNA提取，剩余的外周血標(biāo)本用于染色體核型分析(600u1)，所有標(biāo)本由廣卅J達(dá)安臨檢Ih0、中山附一醫(yī)院及湖南省兒童醫(yī)院提供。2實(shí)驗(yàn)方法(1)染色體核型分析：①制各染色體標(biāo)本②顯帶前預(yù)處理③吉姆

4、薩染色，核型分析。(2)QFPCR：①引物設(shè)計(jì)：針對(duì)21號(hào)染色體上特異的3個(gè)STR位點(diǎn)(D21S1435、D2ISl41l、D21S11)，X染色體上的兩個(gè)STR位點(diǎn)(DXS981、DXS6809)，X、Y染色體上共有的STR位點(diǎn)X22及性別特異性位點(diǎn)AMXY設(shè)計(jì)引物，并在引物的5’端標(biāo)記熒光。②將染色體核型分析診斷為異常的標(biāo)本整理出來(lái)，共162例；隨機(jī)抽取40例正常的標(biāo)本。對(duì)此202例標(biāo)本提取基因組DNA進(jìn)行七重定量熒光PCR擴(kuò)增。③

5、ABl310測(cè)序儀進(jìn)行PCR結(jié)果分析④根據(jù)英國(guó)臨床生化協(xié)會(huì)、臨床分子遺傳協(xié)會(huì)相關(guān)規(guī)定(ACC／CMGSbestpracticemeetingwasheldonthe15thApril2004)：QF—PCR擴(kuò)增后，結(jié)果分析表現(xiàn)為三個(gè)熒光峰，峰值比接近l：1：l或者表現(xiàn)為雙峰，但峰值kL18可判斷為三體者。(3)統(tǒng)計(jì)分析：本實(shí)驗(yàn)叫_I計(jì)量資料用算術(shù)均數(shù)(或幾何均數(shù))標(biāo)準(zhǔn)差(xSD)描述，通過(guò)靈敏度、特異度兩個(gè)指標(biāo)對(duì)QFPCR方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。