抗甲狀腺藥物介導Graves病患者粒細胞缺乏高表達基因的篩選與克隆.pdf

1、目的：篩選、克隆Graves?。℅D）服用抗甲狀腺藥物（ATD）介導粒細胞缺乏患者與粒細胞正?；颊咧g差異表達的、可能對抗甲狀腺藥物致Graves病患者粒細胞缺乏起促進作用的相關基因。 方法：（1）采用淋巴細胞分離液分離GD服用ATD導致粒細胞缺乏患者與粒細胞正常患者的單個核細胞，加入EB病毒進行細胞培養(yǎng)，應用抑制性消減雜交（SSH）的方法構建GD服用ATD導致粒細胞缺乏患者與粒細胞正常患者之間差異表達的cDNA消減文庫（2）克

2、隆，鑒定ATD介導GD患者粒細胞缺乏特異性高表達的基因片段，以生物信息學方法進行初步分析（3）設計基因特異性引物，用5’端和3’端cDNA末端快速擴增法（RACE）進行全長基因序列擴增。 結果：成功構建了具有高消減效率的ATD介導GD患者粒細胞缺乏cDNA消減文庫，對其中陽性克隆的插入cDNA片段進行測序，共獲得34個不同的EST，經(jīng)Blastn程序檢索Genbank表明，其中有21個EST為未知新序列，提示它們可能來自于ATD

3、介導GD患者粒細胞缺乏患者特異性高表達的新基因。這21個可能代表新基因的EST正準備登陸NCBI的Genbank數(shù)據(jù)庫，為從分子生物學水平探討ATD介導GD患者粒細胞缺乏的發(fā)生、發(fā)展機制提供了新的突破口。正通過RACE的方法獲得這些新EST序列的全長cDNA。 結論： 1、成功構建了人 ATD介導GD患者粒細胞缺乏的cDNA消減文庫； 2、初步篩選到34條EST，其中21條新EST,它們可能代表著在ATD介導GD患者粒細胞缺乏中