低溫貯藏下杏鮑菇的木質化及關鍵酶基因的克隆與表達分析.pdf

1、杏鮑菇味道鮮美，具有極高的營養(yǎng)價值，有“平菇之王”之稱。在冷藏條件下，杏鮑菇會發(fā)生硬度上升、發(fā)綿、難以咀嚼等質地劣變現象，導致失去杏鮑菇特有的脆嫩口感，并且會造成營養(yǎng)成分含量的下降，嚴重影響杏鮑菇的貯藏品質。本研究首次對低溫貯藏的杏鮑菇質地變化特征進行研究，探究引起杏鮑菇采后質地劣變的原因，并通過克隆木質素生物合成過程中相關酶的基因，分析這些基因在杏鮑菇木質化過程中的表達水平，從分子水平上探討杏鮑菇采后木質化的相關機理。主要結果如下：<

2、br>　?。?）低溫貯藏的杏鮑菇質地變化特征
　　新鮮杏鮑菇，裝在低密度聚乙烯袋，分別存放在不同的低溫（2℃、4℃、8℃）下18天，測量其質地性狀。結果發(fā)現，在整個貯藏期間杏鮑菇發(fā)生兩次增韌，并且木質素含量與3個木質素合成中關鍵酶活性變化高度相關。幾丁質和纖維素含量與增韌表現出低相關性。我們的研究結果表明，增韌可能主要是由于木質化，從而影響杏鮑菇的采后品質。
　?。?）木質素合成途徑關鍵酶基因的克隆
　　利用RT-PC

3、R、RACE等技術，成功從杏鮑菇中克隆得到了1條PAL基因的全長序列，命名為PePal；以及4條4CL基因（分別命名為Pe4cl1、Pe4cl2、Pe4cl3、Pe4cl4）和1條POD基因（命名為PePod）的3’端部分序列。PePal全長全長2441的序列，包含1個29bp的5’端非編碼區(qū)，一個183bp的3’端非編碼區(qū)，一個2229bp的完整開放閱讀框（open reading frame，ORF），編碼743個氨基酸。Pe4cl

4、1基因片段cDNA長度為1898bp，其中包括119bp的3’端非編碼區(qū)序列和1779bp編碼區(qū)序列，編碼區(qū)編碼了593個氨基酸。Pe4cl2基因片段cDNA長度為1620bp，編碼了540個氨基酸。Pe4cl3基因片段cDNA長度為1406bp，編碼了468個氨基酸。Pe4cl4基因片段cDNA長度為1012bp，編碼了337個氨基酸。PePod基因片段cDNA長度為754bp，其中包括109bp的3’端非編碼區(qū)序列和645bp編碼區(qū)

5、序列，編碼區(qū)編碼了215個氨基酸。
　?。?）杏鮑菇不同冷藏時期木質素生物合成關鍵酶基因的表達特征
　　運用熒光定量PCR（qRT-PCR)技術檢測了杏鮑菇不同冷藏時期木質素生物合成關鍵基因的表達模式。熒光定量PCR結果顯示，在貯藏時間內PePal、Pe4cl1、Pe4cl3基因具有相似的表達模式（升-降-升-降）。前12天貯藏期內，不同貯藏溫度下 PePal、Pe4cl1、Pe4cl3和PePod基因表達水平曲線與PAL、