脊髓室管膜瘤的蛋白質組學研究.pdf

1、第一部分：基于雙向凝膠電泳的正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤差異表達蛋白的篩選與鑒定
　　目的：應用雙向凝膠電泳(2-DE)和基質輔助激光解吸離子電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)的蛋白組學方法，研究正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤的差異表達蛋白質，為進一步探索脊髓室管膜瘤的發(fā)病機制提供基礎。
　　方法：收集7例脊髓室管膜瘤患者的術中標本作為腫瘤組，4例新鮮尸體解剖得到的脊髓室管膜標本作為對照組。將2組標本裂解后提取蛋白質

2、，定量后的蛋白質進行IEF和SDS-PAGE雙向電泳分離，得到的2-DE圖譜經考馬斯亮蘭染色后，通過軟件找到差異蛋白點并且使用MALDI-TOF-MS技術進行鑒定，最終獲得了腫瘤組和對照組的差異蛋白質，部分差異蛋白質進行了Western Blot驗證。
　　結果：建立了基于2-DE串聯MALDI-TOF-MS的正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤差異表達蛋白篩選與鑒定的技術路線。成功鑒定出50個有效的差異蛋白質點(其中腫瘤組較對照組上調2

3、4個，下調13個，僅在腫瘤組中表達10個，僅在對照組表達3個)。Western Blot試驗證實了差異蛋白Vimentin、Annexin I和HSPA8在腫瘤組中的高表達。
　　結論：應用2-DE串聯MALDI-TOF-MS技術成功對正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤進行蛋白組學分析，建立具有高分辨率及可重復性的2-DE圖譜，有效篩選并成功鑒定了50個差異蛋白質。其中的Vimentin、AnnexinI、HSPA8、Calnexin和

4、Calreticulin等蛋白可能與脊髓室管膜瘤的發(fā)病機理有關。
　　第二部分：應用三維SDS-PAGE-SCX-RPLC-Ms/MS技術研究脊髓室管膜瘤和正常脊髓室管膜的蛋白表達譜
　　目的：串聯應用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、強陽離子交換(SCX)、反相液相色譜(RPLC)和串聯質譜(MS/MS)的蛋白組學方法，研究正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤的全蛋白質表達譜，為進一步探索脊髓室管膜瘤的發(fā)病機

5、制提供基礎。
　　方法：收集7例脊髓室管膜瘤患者的術中標本作為腫瘤組，2例手術中取得的脊髓室管膜標本作為對照組。將2組標本裂解后提取蛋白質，定量后的蛋白質先進行SDS-PAGE-維電泳分離，得到的膠條經切割和酶解后，再通過SCX-RPLC分離，分離后的肽段通過LTO-Orbitrap行鑒定，鑒定數據經Sequet數據庫檢索，最終獲得了腫瘤組和對照組的全蛋白質表達譜。應用生物信息學平臺DAVID和KEGG對蛋白質進行了功能分類和病理

6、通路分析。
　　結果：建立了應用于正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤蛋白質表達譜研究的三維SDS-PAGE-SCX-RPLC-MS/MS技術平臺。從正常脊髓室管膜組織和脊髓室管膜瘤中分別鑒定出了2758和2721個蛋白質。
　　結論：首次應用三維SDS-PAGE-SCX-RPLC-MS/MS技術開展了正常脊髓室管膜與脊髓室管膜瘤全蛋白表達譜的研究，建立了脊髓室管膜和脊髓室管膜瘤的蛋白表達譜。表達于腫瘤組和對照組的蛋白質在分子量和等