苯妥英鈉中介的旁分泌作用對心肌梗死后組織修復的影響及相關表達譜芯片研究.pdf

1、心肌梗死后組織修復過程是影響心室重塑發(fā)展方向的決定因素。苯妥英鈉(Phenytoin，PHT)具有促進結締組織增生的藥理特性，近年來的研究顯示，苯妥英鈉可誘導表皮成纖維細胞多種生長因子及其受體表達上調，增強生長因子的自分泌或旁分泌活性，即PHT中介的旁分泌作用。本實驗室的前期工作證實苯妥英鈉可加速心肌梗死后組織修復，其可能機制是通過旁分泌作用，即促進多種生長因子的表達、抑制細胞凋亡、激活內源性修復機制。然而，苯妥英鈉促進心肌梗死后組織修

2、復的具體機制尚不十分清楚。 目的：采用Wistar大鼠心肌梗死模型，并在梗死后14天持續(xù)給予苯妥英鈉，觀察該干預因素對心肌梗死后組織修復過程的影響；高通量cDNA芯片技術觀察大鼠心肌梗死區(qū)不同時點基因表達譜的變化，旨在探討PHT介導的旁分泌機制對心肌梗死后組織修復和心室重塑的影響并探討其潛在的機制。 方法：6-8周雄性Wistar大鼠，結扎大鼠冠脈前降支建立急性心肌梗死模型。成活大鼠隨機分為假手術組(Sham組，n=10

3、)，對照組(MI組，n=26)，苯妥英鈉組(PHT組，n=18)。Sham組為只開胸不結扎，MI組為開胸結扎但不給予苯妥英鈉干預，PHT組以100mg/kg/day給予苯妥英鈉口服。分別于術后3天、7天和14天處死大鼠，經冰PBS灌流后低溫凍存用以組織學分析。心肌組織橫斷面切片經天狼猩紅染色后，采用苦味酸天狼猩紅-偏振光法對心肌梗死區(qū)膠原纖維沉積量、成熟程度的動態(tài)變化進行病理學分析。采用免疫熒光染色對梗死區(qū)新生小動脈密度進行病理學分析。

4、采用AffymetrixGeneChip()RatExpressionSet230系統比較大鼠MI組、PHT組分別在心梗后3天、7天基因表達的變化情況。 結果：心臟病理學分析：(1)心臟重量指標比較：左室體重比(LVIBW)、脛骨長度在各組間比較無顯著差異。(2)膠原容積分數結果：與MI組比較，PHT組術后第3天、第7天和第14天梗死區(qū)CVF顯著增加；MI組及PHT組梗死區(qū)CVF皆隨時間而顯著增加；膠原成分比例結果：與MI組比較

5、，PHT組術后第3天、第7天和第14天梗死區(qū)膠原成熟度顯著增加；PHT組內膠原成熟程度隨時間延長而顯著增加。(3)免疫熒光分析結果：與MI組比較，PHT組小動脈密度及毛細血管密度均顯著增加且差異具有統計學意義。梗死區(qū)表達譜芯片分析：術后3天MI組與術后7天MI組比較共有1165個基因表達發(fā)生變化，其中657個基因上調，508個基因下調；術后3天MI組與術后3天PHT組比較共有66個基因表達發(fā)生變化，其中33個基因上調，33個基因下調；術

6、后3天PHT組與術后7天PHT組比較共有81個基因表達發(fā)生變化，其中11個基因上調，70個基因下調；術后7天MI組與術后7天MI組比較共有個基因表達發(fā)生變化，其中17個上調，16個下調。PHT組與MI組相比發(fā)生變化的基因表達主要涉及到細胞周期、細胞外基質受體、T細胞受體信號途徑、JAK-STAT信號途徑、MAPK信號途徑等。 結論：苯妥英鈉可改善心肌梗死后左室重塑，可能的機制是苯妥英鈉介導的旁分泌機制加速膠原沉積和成熟，促進心肌