SHP2調控少突膠質細胞分化研究.pdf

1、多發(fā)性硬化癥(MS)患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)髓鞘表現(xiàn)為進行性缺失，損傷的髓鞘無法再生。髓鞘的形成包括一系列的過程：干細胞定向分化為少突膠質前體細胞(OPCs)、OPCs增殖、遷移、分化成熟，進而包繞軸突，緊縮形成髓鞘。OPCs分化是髓鞘再生過程中的關鍵環(huán)節(jié)之一，最新觀點認為，OPCs分化受阻是髓鞘難以再生的主要原因之一。然而，OPCs分化的相關調節(jié)機制尚不十分清楚。
　　 OLs的分化受到很多生長因子的調節(jié)，如CNTF、NT3

2、和ErBb2等。生長因子作用于OLs要通過下游信號傳導完成，信號分子磷酸化是這些信號傳導中的主要事件。已有研究表明，PI3K/Akt，F(xiàn)yn/Rho，MAPK等分子磷酸化在OLs細胞分化和髓鞘形成過程中發(fā)揮重要作用。細胞內信號分子磷酸化水平受磷酸激酶和磷酸酶的共同調節(jié)，目前，有關磷酸激酶與髓鞘化之間的關系已成熱點，但磷酸酶與髓鞘化之間的研究還很少。
　　 釩酸鈉(SOV)，是一種磷酸酶的廣譜抑制劑，可以廣泛地抑制磷酸酶活性，可以

3、通過抑制酪氨酸位點的去磷酸化上調酪氨酸激酶相關生長因子受體信號。SHP2是一種胞漿的非受體型酪氨酸磷酸酶，廣泛表達于神經(jīng)系統(tǒng)。研究發(fā)現(xiàn)，SHP2敲除后神經(jīng)干細胞分化為少突膠質細胞的數(shù)量顯著減少，SHP2在腦缺血性損傷后的表達顯著增加。然而，SHP2是否參與調節(jié)OLs細胞分化尚無報道。
　　 本研究包括五個部分：1.通過SOV喂服E18孕大鼠，給予圍產期大鼠SOV處理，免疫組織化學技術檢測新生第7天(P7)SD大鼠腦內胼胝體區(qū)MB

4、P表達水平，觀察到MBP信號明顯減少；2.體外培養(yǎng)純化OPCs，加入不同濃度的SOV處理，發(fā)現(xiàn)25μM及以上濃度均可顯著抑制OLs分化；3.采用酪氨酸磷酸酶特異性抑制劑(PTP inhibitorⅣ)處理，發(fā)現(xiàn)2μM濃度以上顯著抑制OLs細胞分化；4.體外培養(yǎng)純化OPCs，檢測到SHP2在少突膠質細胞的前體和成熟階段均有表達。免疫組織化學染色，進一步確證SHP2在大鼠腦內少突膠質細胞系中存在表達；5.應用RNA i干擾、過表達方法轉染O