CD200+大腸癌干細(xì)胞的分離、鑒定及其基因表達(dá)譜特點(diǎn)的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2011級(jí)碩士學(xué)位論文CD200大腸癌干細(xì)胞的分離、鑒定及其基因表達(dá)譜特點(diǎn)的研究IsolationandIdentificationofCD200ColorectalCancerCellsandtheInvestigationofitsGeneExpressionProfile課題來源：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院張珊珊肖冰教授內(nèi)科學(xué)(消化系病學(xué))學(xué)術(shù)型碩士研究生第一臨床醫(yī)學(xué)院答辯委員

2、會(huì)主席曾志榮教授答辯委員會(huì)委員毛華教授鐘碧慧教授李初俊教授王新穎教授2014年04月30El廣州摘要疾病和抑制排斥反應(yīng)中作為一種免疫耐受信號(hào)。腫瘤的發(fā)展和復(fù)發(fā)的特點(diǎn)是發(fā)生免疫逃逸，而產(chǎn)生腫瘤免疫耐受是腫瘤通過逃避免疫系統(tǒng)的識(shí)別，使腫瘤能夠繼續(xù)生長，因此大腸癌干細(xì)胞可能通過CD200依賴的免疫機(jī)制逃避免疫監(jiān)視，CD200的表達(dá)很可能是大腸癌腫瘤干細(xì)胞與腫瘤免疫之間的重要橋梁。同時(shí)，CD200也被發(fā)現(xiàn)表達(dá)于大腸癌、骨髓瘤、乳腺癌、腦癌、黑色

3、素瘤和正常的間充質(zhì)干細(xì)胞中，并且CD200的表達(dá)與這些腫瘤的發(fā)展進(jìn)程有重要關(guān)聯(lián)。綜上，CD200被認(rèn)為極有可能是一種新型的大腸癌干細(xì)胞標(biāo)志，但這一說法仍缺乏充足的證據(jù)支持。我們前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高表達(dá)CD200的大腸癌細(xì)胞致瘤能力明顯較CD200大腸癌細(xì)胞強(qiáng)。同等數(shù)量的兩群細(xì)胞，CD200成瘤速度明顯快于CD200，且最終形成的瘤體更大。因此，根據(jù)本課題組前期科研成果，本研究首先分析CD200在多種大腸癌細(xì)胞系中表達(dá)情況，然后分選出陽性表

4、達(dá)和陰性細(xì)胞進(jìn)行體外成球及侵襲實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步驗(yàn)證CD200為大腸癌干細(xì)胞表面標(biāo)志。同時(shí)分析CD200特異性大腸癌基因表達(dá)譜，探究與大腸癌獨(dú)特生物學(xué)特性相關(guān)的基因表達(dá)及信號(hào)通路作用情況，對(duì)研究大腸癌干細(xì)胞的作用機(jī)制及尋找根除大腸癌干細(xì)胞的潛在靶點(diǎn)至關(guān)重要。材料與方法：1大腸癌細(xì)胞培養(yǎng)6種大腸癌細(xì)胞株(col0205lovo；sw620；sw480；swlll6；HT29)在含10％胎牛血清的RPMll640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。2流式檢測(cè)CD200

5、細(xì)胞所占比例檢測(cè)6種大腸癌細(xì)胞株CD200細(xì)胞所占比例，收集約106個(gè)細(xì)胞，標(biāo)記APCCD200單克隆抗體，空白對(duì)照組標(biāo)記APC一同源IgG單克隆抗體，4“C避光孵育20分鐘，分析緩沖液洗滌2次，3009離心10分鐘，重懸于分析緩沖液中準(zhǔn)備上機(jī)檢測(cè)。3無血清培養(yǎng)col0205細(xì)胞將col0205細(xì)胞在含DMEM／F12(I：I)，2％B27，20rig／m1EGF，lOng／mlbFGF和10ng／mlLIF的無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周。4