脂蛋白脂酶基因突變?cè)诟咧Y性急性胰腺炎中的研究.pdf

1、前言與目的:
　　高甘油三酯血癥(HTG)是急性胰腺炎(AP)的病因之一，發(fā)病率在急性胰腺炎中占1-4％。在中國(guó)，隨著人們生活方式的改變，高脂血癥性急性胰腺炎(HLP)的發(fā)病率有逐漸上升趨勢(shì)。極度HTG可分為原發(fā)性和繼發(fā)性。極度嗜酒，糖尿病，腎病綜合征以及如雌激素，β受體阻滯劑等藥物的使用也是常見的繼發(fā)因素。但是原發(fā)性極度HTG提示遺傳因素，包括LPL缺乏癥，apo CⅡ和apo A-V缺乏癥，相應(yīng)地是由LPL，APOC2，APO

2、A5基因突變引起的。近來(lái)，新的兩個(gè)蛋白質(zhì)被認(rèn)為在維持LPL功能中具有重要作用，它們是酶成熟因子1(LMF1)和高密度脂蛋白結(jié)合蛋白1(GPIHBP1)。它們也成為了研究高乳糜微粒血癥的新的候選基因。其中臘蛋白脂酶(LPL)基因與高脂血癥性急性胰腺炎的關(guān)系最為密切。有明確家族性高脂血癥，特別是由脂蛋白脂酶基因突變引起的家族性脂蛋白脂酶缺陷癥患者，被認(rèn)為更有可能發(fā)生急性胰腺炎。脂蛋白脂酶是脂質(zhì)代謝的關(guān)鍵酶，以載脂蛋白酶Ⅱ(apo CⅡ)作為

3、輔助因子，分解乳糜微粒(CM)和極低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯(TG)，產(chǎn)生供組織利用的脂肪酸和單甘酰油。脂蛋白脂酶基因突變影響脂蛋白脂肪酶活性，從而導(dǎo)致脂質(zhì)代謝紊亂。脂蛋白脂酶基因是家族性脂蛋白脂酶缺乏癥中最重要的候選基因，它的突變可以解釋極度的高甘油三酯血癥及因此而導(dǎo)致的高脂血癥性急性胰腺炎。國(guó)內(nèi)及國(guó)外均有文獻(xiàn)顯示，在高脂血癥性急性胰腺炎患者中發(fā)現(xiàn)脂蛋白脂酶基因突變。截至目前，共有多于120種脂蛋白脂酶突變被發(fā)現(xiàn)，這些突變主

4、要位于脂蛋白脂酶基因區(qū)第5和第6外顯子上。通過(guò)對(duì)高脂血癥性急性胰腺炎患者進(jìn)行遺傳學(xué)分析，探究脂蛋白脂酶基因在高脂血癥性急性胰腺炎的發(fā)病機(jī)制與關(guān)系。
　　方法:
　　我們研究了一對(duì)高脂血癥性急性胰腺炎母女及她們的5例家庭成員，對(duì)他們的LPL，APOC2，APOA5，LMF1和GPIHBP1基因的編碼區(qū)以及內(nèi)含子外顯子交界區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序分析。測(cè)序結(jié)果與NCBI網(wǎng)站上公布的LPL，APOC2，APOA

5、5，LMF1和GPIHBP1標(biāo)準(zhǔn)序列對(duì)比，篩查突變點(diǎn)。運(yùn)用MassARRAY檢測(cè)法，我們?cè)?13例對(duì)照組（包括43例正常人和70高脂血癥患者）中進(jìn)行突變基因的篩查。對(duì)兩例先證者進(jìn)行肝素后脂蛋白酯酶活性和含量的分析，與10例健康對(duì)照組的肝素后脂蛋白酯酶活性和含量比對(duì)。并分析L279氨基酸殘基在不同物種中的進(jìn)化保守性。
　　結(jié)果:
　　兩例先證者都被發(fā)現(xiàn)是LPL基因上新的Leu279Val突變點(diǎn)與已知Ala98Thr突變點(diǎn)的聯(lián)合

6、雜合突變。1名家庭成員有Leu279Val突變，3名家庭成員有Ala98Thr突變，4名家庭成員有S447X突變。在所有受試者的APOC2，APOA5，LMF1和GPIHBP1基因上并未發(fā)現(xiàn)有突變。在Leu279Val突變點(diǎn)和Ala98Thr突變的篩查中，我們發(fā)現(xiàn)1例高脂血癥組患者被發(fā)現(xiàn)攜帶有Leu279Val突變，他同時(shí)也是高脂血癥性急性胰腺炎患者。我們對(duì)他的基因組DNA也進(jìn)行了LPL，APOC2，APOA5，LMF1和GPIHBP1

7、基因的測(cè)序。發(fā)現(xiàn)他是LPL基因上Leu279Val突變點(diǎn)與GPIHBP1基因上Cys14Phe的聯(lián)合雜合突變。在高脂血癥組其他成員及所有的健康人對(duì)照組中，Leu279Val和Ala98Thr突變都沒有被發(fā)現(xiàn)。與正常對(duì)照組相比，先證者1和先證者2的肝素后LPL活性分別下降了70.07％和55.82％。LPL含量與正常對(duì)照組相比相近。對(duì)L279氨基酸殘基的物種分析顯示，L279氨基酸殘基在不同物種的進(jìn)化中是保守的。
　　結(jié)論: