核受體RXRα-Nur77的表達(dá)及亞細(xì)胞定位對(duì)神經(jīng)元凋亡的影響.pdf

1、目的：探討外源Aβ，及大腦病理性增加Aβ（AD模擬）對(duì)核受體RXRα、Nur77的表達(dá)和亞細(xì)胞定位的影響，RXRα、Nur77表達(dá)和亞細(xì)胞定位對(duì)神經(jīng)元凋亡的影響。
　　方法：以用Aβ25-35和ddH2O分別處理的N2a細(xì)胞，AD小鼠與對(duì)照小鼠的大腦皮層和海馬為研究對(duì)象。PCR結(jié)合免疫組化方法鑒定AD小鼠是否模擬成功。首先，在基因水平上應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法檢測(cè)N2a細(xì)胞和皮層、海馬中RXRα、N ur77的mRNA表達(dá)水平

2、。第二，在蛋白含量水平上應(yīng)用核質(zhì)分離結(jié)合蛋白印記方法檢測(cè)RXRα、N ur77蛋白總含量以及在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中的含量。第三，在蛋白定位上應(yīng)用免疫熒光對(duì)細(xì)胞爬片和大腦冰凍組織切片進(jìn)行定位染色，觀察N2a細(xì)胞與皮層、海馬細(xì)胞中RXRα、N ur77的亞細(xì)胞定位；最后，細(xì)胞凋亡的檢測(cè)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)N2a細(xì)胞凋亡情況，DAPI染色觀察皮層、海馬細(xì)胞的凋亡。
　　結(jié)果：N2a細(xì)胞經(jīng)Aβ處理24h后，RXRαmRNA表達(dá)水平增加了16.47

3、％，Nur77mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯變化；RXRα、Nur77總蛋白量變化無(wú)明顯差異，但RXRα、Nur77在細(xì)胞質(zhì)中的含量與分布增多，RXRα與Nur77分別Control組的2.99%、3.91%增至Aβ25-35處理組的21.4%、24.2%，細(xì)胞凋亡率從Control組1.23%增至Aβ25-35處理組4.58%。與對(duì)照小鼠比較，AD小鼠中RXRα、Nur77mRNA表達(dá)水平在大腦皮層無(wú)明顯差異，但在海馬中分別增加了8.67%、