重組人骨形成蛋白-2治療小鼠急性造血損傷的機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:成年哺乳動物骨髓存在兩類干細胞:造血干細胞和間充質干細胞(造血微環(huán)境的重要組分)。造血細胞的增殖和分化依賴于造血微環(huán)境,造血微環(huán)境中的造血細胞因子和細胞之間的相互作用,促進了造血細胞的增殖和分化。γ射線不僅可以導致急性骨髓抑制,而且還會引起長期的造血損傷后遺癥。長期造血損傷后遺癥的產(chǎn)生主要是因為γ射線損害了造血干細胞的自我更新。我們先前的研究已經(jīng)表明:重組人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)能修復γ射線引起的小鼠急性造血損傷,其作用

2、與其促進造血干細胞的增殖有關。為了進一步證實rhBMP-2修復γ射線引起的小鼠急性造血損傷的機制,我們設計本實驗以期證明rhBMP-2調控的間充質干細胞增殖和分化在治療造血損傷時起重要的作用。
  方法:(1)用XTT的方法檢測rhBMP-2對體外培養(yǎng)的間充質干細胞的增殖作用。(2)用real-timePCR的方法檢測rhBMP-2對間充質干細胞分泌的造血細胞因子mRNA表達的作用。(3)用ELISA試劑盒檢測rhBMP-2對間充

3、質干細胞分泌造血細胞因子的蛋白含量的作用。(4)將綠色熒光蛋白轉基因小鼠骨髓中分離純化的間充質干細胞用Hoechst33342進行標記,然后移植給BALB/c小鼠,移植后6周,分別用免疫熒光染色和流式細胞分析檢測間充質干細胞在體內的分化情況。
  結果:(1)rhBMP-2在濃度為10ng/ml-1×105ng/ml之間能顯著促進MSCs的增殖,呈劑量依賴性。然而,這種增殖作用隨著rhBMP-2濃度進一步增加到1×106ng/ml

4、而開始減弱。(2)rhBMP-2能夠顯著地促進造血細胞因子IL-7、IL-11、G-CSF、M-CSF、SCF的mRNA表達。(3)用rhBMP-2處理體外培養(yǎng)的MSCs后,培養(yǎng)上清中造血細胞因子IL-6、IL-7、IL-11以及M-CSF的蛋白含量明顯高于對照組。(4)當小鼠受到γ射線照射后,MSCs能夠歸巢到輻射損傷的造血組織并分化為造血細胞,rhBMP-2能顯著地增強MSCs的歸巢與分化,從而促進造血重建進程。
  結論:正

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