量子點(diǎn)熒光探針在毛細(xì)管電泳熒光檢測中的應(yīng)用初探及幾種生物活性物質(zhì)的檢測.pdf

1、毛細(xì)管電泳(CE)是上世紀(jì)80年代發(fā)展起來一項(xiàng)重要的分離分析技術(shù)，由于其具有低成本、低消耗、低污染、高靈敏度、高分辨率、高速度等優(yōu)點(diǎn)，符合生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域越來越苛刻的分離分析要求，得到了迅猛的發(fā)展而成為目前強(qiáng)有力的分析技術(shù)之一。CE激光誘導(dǎo)熒光檢測法是目前最靈敏的檢測方法之一，然而由于激光器的成本高、體積大、可選擇的波長少等因素，制約了其發(fā)展和應(yīng)用。隨著高亮度發(fā)光二極管(LED)的出現(xiàn)和發(fā)展，以LED作為熒光檢測裝置的激發(fā)

2、光源，可以大大減小體積和降低成本，為CE的發(fā)展和應(yīng)用提供了更廣闊的前景。 量子點(diǎn)(QDs)是近年發(fā)展起來的一種新型熒光探針，與傳統(tǒng)的有機(jī)熒光染料相比，具有更優(yōu)良的光譜性能。其吸收光譜較寬，不同的量子點(diǎn)可以由同一波長的光激發(fā)，而不同的有機(jī)熒光染料分子，則常常需要采用不同波長的光來激發(fā)。量子點(diǎn)不易漂白，發(fā)射光譜與粒徑大小有關(guān)，通過調(diào)整其粒徑大小，可以發(fā)出不同顏色的熒光，從而使不同生物分子的標(biāo)記、區(qū)分、識別變得更加容易，在生物化學(xué)、細(xì)

3、胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等研究領(lǐng)域顯示了極其廣闊的應(yīng)用前景，探索其在毛細(xì)管電泳分析中的應(yīng)用，具有深遠(yuǎn)的意義。 本文運(yùn)用實(shí)驗(yàn)室自組裝的CE光導(dǎo)纖維LED誘導(dǎo)熒光檢測裝置，建立了幾種生物活性物質(zhì)的分析方法，包括對免疫球蛋白IgG、腎上腺素（EP）和多巴胺（DA）的分離檢測，另外還探討了量子點(diǎn)熒光探針代替其它有機(jī)熒光染料，在毛細(xì)管電泳分析中的應(yīng)用。其研究工作主要包括以下幾個部分： 1.合成了水溶性CdTe量子點(diǎn)，并采用共價偶聯(lián)法，

4、用CdTe量子點(diǎn)標(biāo)記谷胱甘肽。在本實(shí)驗(yàn)室自行設(shè)計(jì)、組裝的毛細(xì)管電泳光導(dǎo)纖維發(fā)光二極管誘導(dǎo)熒光檢測裝置上，以紫色LED作為激發(fā)光源，對量子點(diǎn)熒光探針及其標(biāo)記的生物小分子（谷胱甘肽）進(jìn)行分離，證實(shí)了量子點(diǎn)熒光探針在毛細(xì)管電泳應(yīng)用的可行性。 2.建立了CE光導(dǎo)纖維LED誘導(dǎo)熒光檢測直接測定免疫球蛋白IgG的新方法。該方法以藍(lán)色的LED作為熒光檢測器的激發(fā)光源，熒光素異硫氰酸酯（FITC）作為柱前衍生試劑，采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳，以pH9.

5、2的硼砂溶液為電泳緩沖液進(jìn)行分離檢測。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，IgG的線性范圍是4.5×10-8～1.2×10-6g/L，檢測限為2.0×10-8g/L。將該方法應(yīng)用于人血清中IgG含量的測定，不需要進(jìn)行前期處理，具有簡單、高效、靈敏度高、經(jīng)濟(jì)選擇性好等特點(diǎn)。 3.應(yīng)用CE光導(dǎo)纖維LED誘導(dǎo)熒光檢測裝置，建立了同時測定腎上腺素（EP）和多巴胺（DA）的方法。采用膠束電動色譜分離模式，通過優(yōu)化分離電壓、十二烷基硫酸鈉(SDS)濃度、背