RT-PCR檢測結核分枝桿菌mRNA在利福平快速藥敏試驗中的初步應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[目的]:建立一種快速敏感的結核桿菌mRNA的檢測方法;摸索檢測結核桿菌mRNA用于利福平快速藥敏試驗時的各項參數(shù),從而建立一種新的利福平分子生物學藥敏試驗方法;比較新建方法與BacT/AlERT 3D快速培養(yǎng)法對20株臨床分離株的藥敏檢測結果,分析檢測結核桿菌mRNA在利福平臨床快速藥敏試驗中的應用價值.[材料與方法]:實驗第一部分,以結核桿菌標準菌株H37Rv(ATCC27294)為實驗菌株,經M 7H9液體培養(yǎng)基培養(yǎng),獲得其對數(shù)生

2、長期的菌懸液;采用Tripure總RNA分離試劑輔以超聲粉碎的方法提取結核桿菌總RNA;然后用DNase消化總RNA中污染的基因組DNA;針對α抗原85B的特定編碼序列設計引物,逆轉錄擴增結核桿菌mRNA,產物用瓊脂糖凝膠電脈檢測分析,建立結核桿菌mRNA的RT-PCR檢測方法.[結論]:1.超聲粉碎加Tripure的方法是結核桿菌總RNA提取的理想選擇.2.檢測結核桿菌mRNA時一定要用DNase消化基因組DNA的污染.3.結核桿菌在

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