淫羊藿苷(ICA)對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC-7901增殖的影響.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:觀察中藥提取成分淫羊藿苷(Icariin,ICA)對(duì)人胃癌細(xì)胞株(SGC-7901)增殖的影響。研究不同藥物濃度干預(yù)后,不同時(shí)間點(diǎn)各組胃癌細(xì)胞周期的變化,以及各組細(xì)胞的凋亡情況,探討淫羊藿苷對(duì)胃癌細(xì)胞的影響,評(píng)價(jià)其對(duì)胃癌患者的治療效果。
   方法:第一部分:在DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)胃癌細(xì)胞株(SGC-7901),每隔1d~2d換1次培養(yǎng)液。培養(yǎng)2d后,細(xì)胞至對(duì)數(shù)期,用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗掉非貼壁細(xì)胞,換培養(yǎng)液傳代繼續(xù)培

2、養(yǎng),細(xì)胞鋪滿(mǎn)瓶底時(shí),收集貼壁細(xì)胞。
   第二部分:貼壁細(xì)胞隨機(jī)分成4組。對(duì)照組:加DMEM培養(yǎng)基及血清;ICA干預(yù)組(共3組):加含不同濃度ICA的培養(yǎng)基及血清,培養(yǎng)12、24、36、48小時(shí)。
   第三部分:將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期胃癌細(xì)胞用0.25%胰酶消化,用滅菌PBS稀釋離心去上清。培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞濃度為106/mL,將細(xì)胞按每孔90μL種板,分別設(shè)立對(duì)照組和不同濃度淫羊藿苷(100mg/L,200mg/L

3、,400mg/L)誘導(dǎo)組,每孔分別設(shè)五復(fù)孔,分別在12、24、36、48h收獲。細(xì)胞用孔板離心機(jī)離心,然后去上清,0.25%胰酶消化后,每孔加90μL培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,再加MTT20μL,并增設(shè)陰性對(duì)照,37。C孵育4小時(shí),每孔加入0.04mol/LDMSO溶液100μL,用吸管反復(fù)吹打使接近結(jié)晶顆粒溶解后,用免疫酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)測(cè)光密度值(OD值),計(jì)算抑制率。
   第四部分:將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞分為對(duì)照組、不同濃度ICA(

4、100,200,400mg/L)誘導(dǎo)組,共同培養(yǎng)24h后,收集細(xì)胞,然后將每組細(xì)胞分兩份。將收獲的新鮮細(xì)胞用PBS洗滌1次,80%的冰乙醇固定過(guò)液,再用PBS洗滌1次,各組細(xì)胞加100μL濃度為10mg/L的PI溶液和50μL濃度為0.1%的RnaseA溶液,室溫下避光放置30min,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組的細(xì)胞周期和凋亡率。
   結(jié)果:與對(duì)照組比較,ICA的低、中、高濃度組均對(duì)SGC-7901細(xì)胞有抑制作用,且呈一定的量效、時(shí)

5、效關(guān)系,在中濃度24h抑制作用最為顯著。在同一濃度組中,隨時(shí)間延長(zhǎng)ICA對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制作用逐漸增強(qiáng),于24h達(dá)到高峰,后逐漸減弱。SGC-7901細(xì)胞在不同濃度ICA培養(yǎng)液中培養(yǎng)12h、24h、36h、48h后測(cè)得,三種濃度在同一作用時(shí)間內(nèi)均可使SGC-7901吸光度值(OD)降低,計(jì)算出各濃度組的抑制率,與對(duì)照組比較,均有顯著差異(p<0.05);中濃度組抑制率最明顯。
   不同濃度的ICA培養(yǎng)液溫育細(xì)胞24h后用流式細(xì)胞

6、儀分析細(xì)胞周期。可見(jiàn)與對(duì)照組比較,G1期細(xì)胞比例升高,G2期細(xì)胞比例減少,S期細(xì)胞比例無(wú)明顯變化。在低、中、高三個(gè)不同濃度的ICA培養(yǎng)液培養(yǎng)條件下,細(xì)胞增殖周期都受到不同程度的影響,在中濃度時(shí)細(xì)胞增殖周期變化最大。各濃度組與對(duì)照組同一細(xì)胞周期比較,均有顯著差異(p<0.05)。低、中、高(即100mg/L,200mg/L,400mg/L)三個(gè)濃度的ICA培養(yǎng)液溫育細(xì)胞24h后用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡。對(duì)照組凋亡率為5.46%,在低、中、

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