農桿菌介導AtNHX1基因轉化葡萄砧木99R的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以葡萄砧木99R(Vitis berlandieriPlanchxV．rupestris Scheele’99R’)為材料，建立其分化頻率較高，培養(yǎng)方法簡單的再生體系，為葡萄遺傳轉化研究打下基礎。采用農桿菌介導法，將Na<'+>/H<'+>反向轉運蛋白AtNHXl基因導入葡萄砧木99R中，以獲得耐鹽堿的砧木品種。本研究系統地探討了提高葡萄再生和遺傳轉化效率的影響因子，優(yōu)化了農桿菌介導法轉化葡萄的主要技術參數，建立起高效的遺傳轉化體

2、系。研究結果如下： 1.以葡萄砧木99R試管苗葉片、葉柄和莖段為外植體誘導不定芽再生。在MS培養(yǎng)基中附加不同濃度的6-BA與IBA、TDZ與IBA、6-BA與2,4-D組合。結果表明，葉片和葉柄適宜的再生培養(yǎng)基為MS+BA5.0mg·L<'-1>+IBAO·1mg·L<'-1>，再生率分別為40.54％和50.00％，莖段為MS+BA2.0mg-L<'-1>_+IBA0.02mg·L<'-1>，再生率達62.50％。TDZ與IBA組合對

3、葡萄砧木99R不定芽的誘導效果較差，再生率最高的也只有7.69％。6-BA-2,4-D組合以MS+BA8mg·L<'-1>+2,4-D0.05mg·L<'-1>_下再生率最高，葉柄達42.11％。一定時間的暗培養(yǎng)處理利于葡萄砧木99R不定芽的再生，3周為最適宜的暗培養(yǎng)時間。不同節(jié)位外植體不定芽再生率隨葉片節(jié)位的下降而降低。2．以葡萄砧木99R的葉片、葉柄及莖段為農桿菌介導轉化受體，通過對GUS基因的瞬時表達率的分析，研究此轉化體系的最佳

4、實驗參數。實驗表明，侵染4分鐘、共培養(yǎng)2天、Km3.0mg·L<'-1>，添加AS75mg·L<'-1>和Cef250mg·L<'-1>時，GUS的瞬時表達率最高。在MS+BA5.0mg·L<'-1>+IBA0.1mg·L<'-1>+Cef250mg·L<'-1>+Km3.0mg·L<'-1>培養(yǎng)基上繼代篩選獲得抗性芽。3．用優(yōu)化的農桿菌介導法對葡萄砧木99R的2546個外植體轉化AtNHXl基因，獲得25株抗性苗，轉化率為0.98％，

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