新型結核病亞單位疫苗的評價.pdf

1、結核病(Tuberculosis，TB)是由結核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis, Mtb）引起的，是一種長期危害人類健康的疾病，同艾滋病、瘧疾并列為世界三大疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織于2013年公布的“GlobalTuberculosis Report2013”顯示2012年全球有860萬新發(fā)結核病病例，130多萬結核病死亡病例。到目前為止，卡介苗(BCG)是唯一的被批準的結核病預防用疫苗，對兒童的保護效果很好，

2、但是對成人的保護力是1％-80％不等，而且有人群和地區(qū)的差異。因此研發(fā)新型的高效的結核病防治疫苗是各國學者努力的重點。本研究中選用結核桿菌兩種重組蛋白Ag85B和EC為抗原成份，研究鋁佐劑和Poly(I∶C)佐劑對兩種抗原的免疫輔助效應，并篩選出Ag85B+EC+Al+Poly(I∶C)這一候選疫苗在豚鼠預防模型和潛伏感染模型上評價其保護效力和免疫治療作用。
　　一、新型結核病亞單位疫苗的免疫原性評價
　　免疫小鼠對預期疫苗

3、的免疫原性進行初步評價。對BALB/c小鼠后肢內(nèi)側肌肉進行注射，共注射3次，間隔10天，第3針后兩周摘眼球采血，分血清，用于ELISA檢測檢測Ag85B蛋白和EC蛋白特異性IgG水平，同時取脾分離淋巴細胞，進行抗原特異性的IFN-γ ELISPOT檢測。結果表明，Ag85B+EC+Al+Poly(I∶C)組小鼠血清中抗原特異性IgG水平、分泌抗原特異性IFN-γ細胞數(shù)量均高于對照組，而且與單獨給予蛋白免疫組比較也是顯著增高。這表明Ag8

4、5B+EC+Al+Poly(I∶C)在小鼠體內(nèi)引起較高的細胞免疫和體液免疫反應，可作為候選疫苗繼續(xù)進行其他相關研究。
　　二、新型結核病亞單位疫苗預防結核感染的評價
　　在豚鼠預防模型上對候選疫苗(Ag85B+EC+Al+Poly(I∶C))的抗結核保護作用進行評價。主要是觀察結核分支桿菌攻擊后豚鼠相關臟器的病變情況及脾臟荷菌數(shù)，并和BCG的保護效果相比較。疫苗組和陰性組均免疫3次，間隔10天，BCG組僅其它組第3次免疫時免

5、疫1針。末次免疫30天后攻毒500 CFU/ml的細菌懸液進行攻毒，0.5 ml/只，感染途徑為皮下注射。攻毒41天后解剖動物。豚鼠腹腔注射戊巴比妥鈉進行安樂死，取肝臟、脾臟和肺臟進行病理檢查，計算病變評分;取脾臟，研磨后接種于改良羅氏培養(yǎng)基上，四周后計數(shù)菌落數(shù)然后計算脾菌負荷量。結果表明，候選疫苗(Ag85B+EC+Al+Poly(I∶C))不能明顯減輕Mtb攻毒后豚鼠的臟器病變，也不能有效抑制Mtb在動物體內(nèi)的增殖。這兩項指標較生理

6、鹽水組僅略有降低，無顯著性差異，而BCG組的病變指數(shù)和脾荷菌數(shù)都降低明顯。說明BCG有很好的結核感染預防作用，但是候選疫苗并沒有有效的保護效果，即這一疫苗不適合做預防用疫苗。
　　三、新型結核病亞單位疫苗對結核潛伏感染治療的評價
　　動物感染Mtb成功后，給予異煙肼化學治療使動物處于潛伏感染狀態(tài)，然后再用候選疫苗進行治療，主要觀察豚鼠體重、相關臟器的病變情況及脾、肺荷菌數(shù)變化情況，以評價Poly(I∶C)佐劑在感染后治療中的

7、免疫刺激效應。經(jīng)腹股溝皮下感染Mtb單細胞懸液，5000 CFU/0.5 ml/只。皮試確定感染成功后，用異煙肼灌胃治療，10 mg/0.5 ml/只，每周一、三、五給藥，共給藥4周?；瘜W治療結束后分組，用疫苗治療，均為大腿肌肉給藥，治療6次，間隔時間為10天。末次治療后4周進行解剖。解剖前對豚鼠體重進行稱量，以觀察疫苗對體重是否有影響，然后對豚鼠腹腔注射戊巴比妥鈉進行安樂死，取肝臟、脾臟和肺臟進行病理檢查，計算病變評分;取脾臟和肺，研