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文檔簡介
1、目的:建立PCR-反向斑點(diǎn)雜交檢測SLC25A13基因突變Ⅰ、突變Ⅲ和突變X技術(shù)。 方法: 1.設(shè)計與合成SLC25A13基因突變Ⅰ、Ⅲ、X寡核苷酸探針。 2.選擇不同濃度探針、不同雜交溫度和不同洗膜溫度進(jìn)行雜交檢測,探索最佳雜交條件。 3.應(yīng)用已建立的反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)檢測已知基因突變和未知基因突變患兒,并進(jìn)行測序分析,觀察兩種檢測方法的結(jié)果符合率。 結(jié)果: 1.0.45μm孔徑尼龍膜、1
2、5-20pmol/μL探針濃度、42.5℃雜交溫度、42.5℃洗膜溫度雜交結(jié)果最理想。 2.100例已知突變組患兒用PCR-反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)檢出突變Ⅰ純合子17例、Ⅰ/Ⅲ和Ⅲ/Ⅹ復(fù)合雜合子各1例,Ⅰ/Ⅹ復(fù)合雜合子2例,單條等位基因攜帶突變Ⅰ44例,單條等位基因攜帶突變Ⅲ和單條等位基因攜帶突變Ⅹ1例1人,與PCR-DNA直接測序法檢出結(jié)果一致,符合率100%。 3.50例未知突變組中,用PCR-反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)共檢出突變Ⅰ
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