γ-分泌酶的四個核心亞基及CD147對β-淀粉樣蛋白影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：研究組成γ-分泌酶的PS-1、APH-1、PEN-2和NCT四個核心亞基在HEK293-T細胞中的表達情況，探討CD147在小鼠胚胎成纖維細胞中超表達對γ分泌酶活性的影響。
　　方法：體外培養(yǎng)HEK293-T細胞,從中提取全蛋白，蛋白定量后分別用四種蛋白的抗體對其進行western blot分析。提取HEK293-T中的總RNA并反轉(zhuǎn)錄出cDNA,以總的cDNA為模版，通過引物經(jīng)PCR擴增CD147基因，以pMD18-T、p

2、EGFP-N1分別作為克隆載體和表達載體來構(gòu)建重組載體。以CD147cDNA轉(zhuǎn)染敲除淀粉樣前體蛋白表達基因的小鼠胚胎成纖維細胞系,以梯度濃度G418篩選CD147表達量最高的細胞,并提取實驗組樣本E1、E2及IPE2和對照組樣本C1、C2和IPC2中γ分泌酶復(fù)合物。蛋白質(zhì)免疫印跡檢測CD147的表達量，酶聯(lián)免疫吸附分析樣品Aβ40和Aβ42的產(chǎn)量。
　　結(jié)果：在HEK293-T細胞中鑒定了γ-分泌酶核心亞基的表達情況。CD147樣

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