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文檔簡介
1、研究背景:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種多發(fā)生于青年女性,可累及多器官、多系統(tǒng),以自身抗體產(chǎn)生和免疫復合物沉積為病理特征的自身免疫性結(jié)締組織疾病。SLE發(fā)病機制到現(xiàn)在尚未完全明確,大量研究顯示,遺傳、內(nèi)分泌、感染、免疫異常和一些環(huán)境因素與本病的發(fā)生有關,其中,遺傳因素在SLE的發(fā)病中起到重要作用。
過去二十多年,許多研究小組利用遺傳連鎖和關聯(lián)研究,發(fā)現(xiàn)了大量SLE的易感基因,如HLA,STAT4,IRF5,ITGAM和PTPN
2、22等。隨著Human Haplotype Map(HapMap)的完成以及高效廉價的高通量基因分型實驗技術的應用,2008年以來,利用全基因組關聯(lián)分析(Genome-wide association study,GWAS)在對不同種族人的SLE患者進行研究時發(fā)現(xiàn)了40多個易感基因/位點。其中,2013年,李揚等以GWAS數(shù)據(jù)庫(7260個銀屑病病例和9842個對照以及2207個SLE病例和9842個對照)為基礎,通過GWAS分析,發(fā)現(xiàn)
3、了銀屑病與SLE共同的易感基因位點(NFKBIA和IL-28RA),其中,IL-28RA(全稱為Interleukin-28 receptor,alpha,又名IFNLR1;LCR2;CRF2/12;IL-28R1)基因的單個核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)rs4649203與SLE易感性顯著相關(P=9.90×10-09)。IL-28RA基因編碼的蛋白屬于II型細胞因子受體家族,此蛋
4、白同IL-10受體β(Interleukin-10 receptor,beta,IL-10RB)組成一個受體復合物,此受體復合物與III型IFN的3個細胞因子(IL-28A、IL-28B、IL-29)相互作用,細胞高表達此受體復合體后導致細胞對于 IL-28A、IL-29的反應增強,而對于 IL-28B的反應減弱,通過刺激JAK-STAT信號通路,從而在細胞的增殖、分化、凋亡以及免疫調(diào)節(jié)等多種生物學過程發(fā)揮作用。IL-28RA基因與銀屑
5、病、SLE、慢性丙型肝炎、多發(fā)性硬化癥、過敏性鼻炎等疾病有關。本研究通過運用實時熒光定量PCR技術,測定IL-28RA基因的mRNA在SLE患者以及正常對照中的表達情況,來探討IL-28RA基因在SLE發(fā)病中的作用及其可能作用機制。
目的:探討 SLE患者與健康對照的外周血學單個核細胞(PBMCs)中IL-28RA基因mRNA表達情況及差異,了解IL-28RA基因mRNA表達與SLE活動度指數(shù)(SLEDAI)及易感位點SNP
6、rs4649203的相關性。
方法:收集SLE患者62例,正常對照69例,從外周血單個核細胞(PBMCs)中提取出mRNA,然后逆轉(zhuǎn)錄為complementary DNA(cDNA),加入相應的熒光染料、引物,利用ABI7900HT高通量熒光定量PCR技術檢測外周血單個核細胞中IL-28RA基因mRNA的表達情況;從研究對象外周血提取DNA,濃度標準化后,經(jīng)Sequenom MassArray技術對所有研究對象DNA樣本進行S
7、NP rs4649203位點的基因分型;收集整理所有實驗數(shù)據(jù),用SPSS20.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。
結(jié)果:SLE患者IL-28RA基因 mRNA表達水平高于正常對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.001);IL-28RA基因mRNA表達水平與SLEDAI無相關性(r=0.045,P=0.726);IL-28RA基因mRNA表達水平與SNP rs4649203無相關性(P>0.05)。
結(jié)論:IL-28RA基因表達
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