間充質干細胞向食道組織細胞的誘導分化及其在食道組織再生中的應用.pdf

1、目的：
　　探討間充質干細胞（MSC）向食道平滑肌細胞、上皮細胞誘導分化的有效方法和機制，為食道組織工程提供種子細胞；探索電紡絲纖維、脫細胞食道粘膜與生物可降解聚氨酯（PU）復合支架的構建以及動物體內重建修復食道缺損的可行性方法。
　　方法：
　　以密度梯度法提取和培養(yǎng)MSC，流式細胞術檢測CD29、CD34、CD45、CD44、CD90的表達情況。分別采用與成熟平滑肌細胞共培養(yǎng)，EGF等誘導劑直接誘導的方法，誘導MS

2、C向平滑肌細胞和上皮細胞分化，通過形態(tài)觀察、免疫熒光染色等方法檢測上述誘導方法的有效性。另一方面，以靜電紡絲法制備PCL/SF（聚己內酯/絲素）多孔納米纖維（模擬食道基膜niche），表面活性劑聯(lián)合DNA酶法制備脫細胞食道粘膜基質，以生物可降解PU為基材制備具有微槽圖案的支架（支持肌組織生長），以正常食道的組織學構造為導向，復合上述多層支架構造，制備了可同時支持食道組織中粘膜、粘膜下層和肌層細胞和組織再生的復合支架。以MSC為種子細胞，

3、新西蘭大白兔為實驗動物，首先行背部皮下埋植以檢測支架的組織相容性及支架在體內的作用，包括炎癥、周圍組織供血、支架降解等；其次，建立小型動物缺損模型，以片狀支架植入頸段食道，以檢測支架與體內食道的作用以及修復小范圍食道缺損的可行性；最后，在上述實驗成功的基礎上，構建管狀食道支架，建立原位替代整環(huán)食道使其再生的技術，包括粘膜和肌層的再生。
　　結果：
　　培養(yǎng)的MSC細胞梭形，呈旋渦狀排列，強表達間充質干細胞的特征蛋白CD29、

4、CD44、CD90；不表達CD34、CD45。誘導分化的MSC分別表達平滑肌細胞、上皮細胞的特異蛋
　　白α-actin和CK14。動物皮下實驗結果顯示支架具有良好的生物學性能；原位替代實驗中，所有兔子未出現(xiàn)吻合口瘺，染色結果顯示手術部位實現(xiàn)上皮化，并可見平滑肌再生。
　　結論：
　　MSC采用上述方法可以完成平滑肌細胞、上皮細胞的誘導分化。由電紡絲纖維、脫細胞食道粘膜與有槽化聚氨酯（PU）復合構建的支架，能支持MSC