大鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)基因克隆、表達的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、胰島素樣生長因子1(IGF-1)是由70個氨基酸殘基組成的蛋白質.在本該的研究工作中,以大鼠基因組DNA為模板采用外顯子拼接法成功得括增出大鼠IGF-1基因成熟肽編碼序列;經(jīng)限制性內節(jié)酶處理后,將其克隆入pUC18質粒,并在此基礎上進一步構建了表達型重組質粒pGEX-IGF-1.經(jīng)誘導表達、親和層析純化后獲得了融合蛋白GST-IGF-1,經(jīng)WestenmBlot檢驗證明融合蛋白具有IGF-1的免疫活性.以Xa因子對融合蛋白進行酶切使IG

2、F-1與擔體蛋白分離,超波離心后得到了重組大鼠IGF-1純品.以市售試劑級重組人IGF-1作為對照,采用H<,3>TdR摻入法對重組大鼠IGF-1的生物活性進行了檢測,證明其具有生物活性.實驗中以融合蛋白GST-IGF-1作為抗原對雞進行了免疫從雞蛋中提取到了抗IGF-1的特異性卵黃免疫球蛋白,并利用抗IGF-1多克隆抗體IgY作為捕獲抗體和檢測抗體,建立了血清中IGF-1雙抗體夾心酶免疫檢測方法.在成功的構建了pUC-IGF-1質粒的

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