大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞來源心室肌樣活細胞的體外誘導(dǎo)及其特異標(biāo)記的研究.pdf

1、該課題以成年Wistar大鼠骨髓MSCs為研究對象,著重探討了骨髓MSCs在5-氮胞苷誘導(dǎo)下向心室肌樣細胞分化的可行性及其可能機理,利用心室肌特異的MLC-2v啟動子驅(qū)動的EGFP特異標(biāo)記了骨髓MSCs分化的心室肌樣細胞,為進一步篩選和研究骨髓MSCs來源心室肌樣活細胞奠定了基礎(chǔ).由以上結(jié)果可得出以下結(jié)論:1、大鼠骨髓MSCs在5-氮胞苷(10μM)誘導(dǎo)后開始,具有肌管形成細胞形態(tài)特點的桿狀或球狀細胞的出現(xiàn),胚胎型心肌特有的actin-

2、a和心室肌特有的MLC-2v結(jié)構(gòu)蛋白,功能性受體β<,1>-腎上腺素受體(β<,1>-AR),β<,2>-AR和心肌細胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NKx2.5/csx,GATA4,MEF-2D的表達,證實了MSCs大鼠能在體外分化為包括心室肌樣細胞在內(nèi)的心肌樣細胞.2、5-氮胞苷(10μM)誘導(dǎo)分化過程中MSCs內(nèi)心肌細胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NKx2.5/csx,GATA4,MEF-2D的表達增高也提示它們可能參與MSCs向心肌樣細胞分化的轉(zhuǎn)錄調(diào)控.

3、3、轉(zhuǎn)染pMLC-EGFP的MSCs與未轉(zhuǎn)染者的生長曲線相似,MSCs在5-氮胞苷(10μM)誘導(dǎo)后1W開始表達EGFP和MLC-2v,不但表明pMLC-EGFP轉(zhuǎn)染并不明顯影響MSCs的生長和向心室肌樣細胞分化的能力,MLC-2v啟動子的活性足以驅(qū)動EGFP的表達,而且說明諸如EGFP等外源性基因可以在MSCs中表達.4、Cy3偶聯(lián)的MLC-2v和EGFP在已轉(zhuǎn)染的MSCs內(nèi)的共表達和表達時相的一致性證實EGFP在MLC-2v啟動子驅(qū)