黃芪抗腦缺血及其增強腦缺血耐受的實驗研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩88頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的:通過動物實驗證實黃芪具有抗腦缺血損傷以及增強腦預缺血(cerebral ischemic preconditioning,CIP)腦保護效果、促進腦缺血耐受形成的作用,并從調控凋亡相關基因Bax、bcl-2蛋白表達,抑制細胞凋亡,以及調節(jié)星型膠質細胞(astrocyte,AST)活化狀態(tài)等角度,初步探討其作用機制,進一步為臨床使用黃芪預防和治療腦缺血性疾病提供實驗依據。 方法: 第一部 分黃芪抗腦缺血及CI

2、P腦保護作用的實驗研究將96只昆明小鼠隨機分為假手術組、缺血損傷組、BIT模型組和黃芪預防組,每組n=24。黃芪預防組腹腔注射黃芪注射液3.3ml/kg,1次/日,連續(xù)3d;假手術組、缺血損傷組和BIT模型組腹腔注射等量生理鹽水。初次給藥1h后,BIT模型組夾閉雙側頸總動脈6min作為預缺血,然后恢復灌流;其余各組只暴露雙頸總動脈不阻斷血流。末次給藥1h后,缺血損傷組、BIT模型組和黃芪預防組均阻斷雙側頸總動脈血流20min,然后恢復灌

3、流;假手術組只暴露頸總動脈不阻斷血流。術后24h從各組隨機選取12只小鼠斷頭剝取全腦,多聚甲醛固定,石蠟切片,免疫組化檢測海馬Bax、bcl-2蛋白表達。其余小鼠于術后7d全部處死,剝取全腦,冠狀切取視交叉后1至4mm腦片,多聚甲醛固定,石蠟切片,HE染色,光鏡下觀察海馬CAl區(qū)組織學分級和神經元密度(neuronal density,ND),并進行GFAP免疫組化和TUNEL細胞凋亡檢測。 第二部 分黃芪協同CIP增強

4、腦缺血耐受的實驗研究將120只昆明小鼠隨機分為假手術組、缺血損傷組、BIT模型組、黃芪預防組和黃芪干預組,每組n=24。黃芪預防組和黃芪干預組腹腔注射黃芪注射液,每次3.3ml/kg,1次/日,連續(xù)3d;假手術組、缺血損傷組和BIT模型組腹腔注射等量生理鹽水。初次給藥1h后,BIT模型組和黃芪干預組夾閉雙側頸總動脈6min作為預缺血,然后恢復灌流;其余各組只暴露雙側頸總動脈不阻斷血流。末次給藥1h后,缺血損傷組、BIT模型組、黃芪預防組

5、和黃芪干預組均阻斷雙側頸總動脈血流40min,然后恢復灌流;假手術組只暴露頸總動脈不阻斷血流。術后24h從各組隨機選取12只小鼠斷頭剝取全腦,多聚甲醛固定,石蠟切片,免疫組化檢測海馬Bax、bcl-2蛋白表達。其余小鼠于術后7d全部處死,剝取全腦,冠狀切取視交叉后1至4mm腦片,多聚甲醛固定,石蠟切片,HE染色,光鏡下觀察海馬CA1區(qū)組織學分級和神經元密度(neuronal density,ND),并進行GFAP免疫組化和TUNEL細胞

6、凋亡檢測。 結果: 第一部分黃芪抗腦缺血及CIP腦保護作用的實驗研究。 1.術后7d海馬CA1區(qū)組織病理學改變光鏡觀察發(fā)現,假手術組海馬CA1區(qū)無明顯組織學損傷,組織學分級多為0級或1級。缺血損傷組海馬CA1區(qū)損傷明顯,主要表現為錐體細胞缺失較多,殘存的錐體細胞排列紊亂,多數錐體細胞體積縮小,胞核固縮,染色較深,組織學分級多為2級或3級,與假手術組相比有顯著性差異(P<0.05)。BIT模型組和黃芪預防組海馬CA

7、1區(qū)組織學損傷輕微,偶有散在的神經元缺失,胞核固縮,組織學分級多為1級或0級,與缺血損傷組相比差異顯著(P<0.05)。 通過計算海馬CA1區(qū)神經元密度得知,假手術組(ND=216±18 n/mm)、BIT模型組(ND=154±19 n/mm)和黃芪預防組(ND=160±18 n/mm)神經元密度均明顯高于缺血損傷組(ND=74±7 n/mm,P<0.01)。 2.術后7d海馬CAl區(qū)GFAP表達的變化光鏡觀察發(fā)現,假手

8、術組海馬CA1區(qū)GFAP表達陰性或僅見少量表達。與假手術組相比,缺血損傷組海馬CA1區(qū)GFAP呈弱陽性表達,表現為星形膠質細胞胞體瘦小且數目較少,染色較淺。與缺血組相比,BIT模型組和黃芪預防組海馬CA1區(qū)GFAP活化的星形膠質細胞數目明顯增多,胞體肥大,突起明顯增多增長,多呈中等陽性或強陽性表達。 3.術后24h海馬CA1區(qū)Bax和bcl-2蛋白表達變化假手術組Bax蛋白多見陰性或微弱表達,bcl-2未見明顯表達。與假手術組相

9、比,缺血損傷組Bax表達明顯增多,呈中等陽性(P<0.01);bcl-2表達可見有增多趨勢,多呈弱陽性表達(P>0.05)。與缺血損傷組相比,BIT模型組和黃芪預防組Bax表達明顯減少,呈弱陽性表達,(P<0.05);bcl-2表達明顯增多,呈強陽性表達(P<0.05)。 4.術后7d海馬CA1區(qū)TUNEL標記凋亡細胞的變化假手術組未見或偶見標記的陽性細胞。與假手術組相比,缺血損傷組可見TUNEL標記的陽性細胞數目明顯增多,胞核

10、被染成棕黃色,細胞間隙增大,排列不規(guī)則。與缺血組相比,BIT模型組和黃芪預防組陽性細胞數目的表達明顯減少。 第二部分黃芪協同CIP增強腦缺血耐受的實驗研究。 1.術后7d海馬CAl區(qū)組織病理學改變假手術組海馬CA1區(qū)無明顯組織學損傷,組織學分級多為0級或1級,神經元密度ND=216±18 n/mm。缺血損傷組海馬CA1區(qū)損傷明顯,組織學分級多為2級或3級,神經元密度為ND=59±9 n/mm,與假手術組相比有顯著性差異(

11、P<0.01)。BIT模型組和黃芪預防組海馬CA1區(qū)損傷明顯,組織學分級多為2級或3級,ND=59±13 n/mm和ND=62±13 n/mm,二者之間無顯著性差異(P>0.05);與假手術組相比,有顯著性差異(P<0.05);與缺血損傷組相比無顯著性差異(P>0.05)。黃芪干預組海馬CA1區(qū)組織學分級多為1級或2級,明顯低于缺血損傷組(P<0.01)、BIT模型組(P<0.05)和黃芪預防組(P<0.05),又明顯高于假手術組(P<

12、0.05);神經元密度(ND=114±2 n/mm)明顯高于缺血損傷組(P<0.01)、BIT模型組(P<0.05)和黃芪預防組(P<0.05),又明顯低于假手術組(P<0.05)。 2.術后7d海馬CAl區(qū)GFAP表達的變化光鏡觀察發(fā)現,假手術組海馬CA1區(qū)GFAP表達為陰性或僅見少量表達。與假手術組相比,缺血損傷組、BIT模型組和黃芪預防組海馬CA1區(qū)GFAP呈弱陽性表達或中等陽性表達,三者之間無明顯差異。黃芪干預組海馬CA

13、1區(qū)GFAP表達多呈強陽性表達,與缺血損傷組、BIT模型組和黃芪預防組相比有明顯差異。 3.術后24d海馬CAl區(qū)Bax和bcl-2蛋白表達變化與假手術組相比,缺血損傷組、BIT模型組和黃芪預防組Bax表達明顯增多,多呈強陽性;bcl-2表達亦明顯增多,多為弱陽性或中等陽性,有統計學意義(P<0.05);但三者之間無顯著性差異(P>0.05)。與缺血損傷組、BIT模型組和黃芪預防組相比,黃芪干預組Bax表達明顯減少,多為弱陽性或

14、中等陽性(P<0.05);bcl-2表達明顯增多,多為中等陽性或強陽性(P<0.05)。 4.術后7d海馬CA1區(qū)TUNEL標記凋亡細胞的變化與假手術組相比,缺血損傷組、BIT模型組和黃芪預防組可見TUNEL標記的陽性細胞數目明顯增多,胞核可見大量棕褐色標記物,可見到大量的胞核固縮,但三者之間無明顯差異。與缺血損傷組、BIT模型組和黃芪預防組相比,黃芪干預組可見陽性細胞數目的表達明顯減少,但較假手術組表達明顯增多。 結論

15、: 1. 通過夾閉雙頸總動脈導致小鼠前腦缺血20min,可引起明顯的海馬組織損傷,腦缺血40min可使海馬組織損傷有加重趨勢,而黃芪對腦缺血引起的小鼠海馬組織損傷具有明顯的保護作用。 2. 黃芪能夠明顯增強海馬CA1區(qū)bcl-2蛋白表達,降低Bax蛋白表達,上調bcl-2/Bax比例,從而抑制細胞凋亡,減輕腦缺血引起的海馬神經元損傷;同時,黃芪能夠明顯上調缺血腦組織GFAP表達,增強星形膠質細胞的活化狀態(tài),從而起到保護神

16、經元的作用。這些可能是本方抗腦缺血損傷的部分機制。 3.以6min腦缺血作為預處理(CIP),可對間隔2d后20min腦缺血引起的海馬神經元損傷產生一定的保護作用。但是,6min CIP的腦保護作用是有限的,對后續(xù)40min腦缺血引起的海馬神經元損傷幾乎不產生保護,而黃芪能夠對CIP產生良性干預效應,增強其腦保護作用,促進腦缺血耐受形成。 4.在CIP誘導BIT形成過程中,通過黃芪的干預,能夠使海馬CA1區(qū)bcl-2表達

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論