洛鉑對人宮頸癌CaSki細胞生長影響的機制研究.pdf

1、目的：探討洛鉑對宮頸癌 CaSki細胞增殖、細胞周期及凋亡的影響以及洛鉑作用宮頸癌細胞前后蛋白質(zhì)組的變化。
　　方法：1.體外培養(yǎng)CaSki細胞，取對數(shù)生長期的宮頸癌CaSki細胞，分為陰性對照組和實驗組(加入不同濃度洛鉑:2、4、6、8、12、16、24和32μg/ml)，作用24、48、72小時，進行MTT實驗。
　　2.取對數(shù)生長期的宮頸癌CaSki細胞，分為陰性對照組和實驗組（加入不同濃度洛鉑:2、6和12μg/ml

2、），作用24、48、72小時，倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)學(xué)改變，流式細胞技術(shù)檢測洛鉑對宮頸癌細胞的細胞周期阻滯、細胞凋亡誘導(dǎo)作用。
　　3.6?g/ml洛鉑作用細胞48h，分別收集洛鉑處理組與對照組細胞，提取細胞總蛋白并運用雙向凝膠電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)，PDOuest軟件分析洛鉑處理前后差異表達的蛋白質(zhì)，選取明顯表達差異在兩倍以上的11個蛋白質(zhì)斑點，運用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)分析鑒定蛋白質(zhì)樣品。
　　結(jié)果1.

3、洛鉑能夠抑制宮頸癌CaSki細胞的增殖，呈濃度和時間依賴。
　　2.洛鉑能夠誘導(dǎo)宮頸癌CaSki細胞凋亡，呈濃度和時間依賴；倒置顯微鏡下可見明顯的凋亡形態(tài)學(xué)改變，流式細胞檢測示洛鉑低濃度短時間作用使細胞周期阻滯在S期，高濃度長時間作用使細胞周期阻滯在G0/G1期。
　　3.經(jīng)雙向凝膠電泳和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析后，成功鑒定了11個蛋白質(zhì)，包括泛素羧基末端水解酶16、不均一核糖核蛋白 A2/B1、多聚嘧啶結(jié)合蛋白、核糖磷酸焦磷