MUC2與結直腸癌的相關性研究.pdf

1、東南大學博士學位論文MUC2與結直腸癌的相關性研究姓名：卜曉東申請學位級別：博士專業(yè)：內科學指導教師：黃培林20111014東南大學博士學位論文和遷移能力的變化。7建立裸鼠移植瘤模型，觀察穩(wěn)定轉染細胞株裸鼠體內成瘤情況，移植瘤組織HE染色，觀察腫瘤組織形態(tài)，免疫組織化學技術檢測移植瘤組織中MUC2、Ki67和MMP9蛋白表達水平的變化?！?采用一定濃度和作用時間的Notch信號通路抑制劑DAPT處理靶細胞，實時定量PCR和west鋤bl

2、ot技術檢測Hesl、Maml、MUC21Tl】剛A和蛋白表達水平的變化。9MTr實驗、平板克隆形成實驗、T啪swell小室實驗檢測Notch信號通路抑制劑DAPT對靶細胞增殖、侵襲和遷移能力的影響。l結果l1免疫組織化學結果顯示，NMC組中MuC2蛋白表達水平最低(4615％)，統(tǒng)計學分析表明，在HPLGDHGDNMC序列中，呈現MUC2蛋白表達的順序下降(產一O73436，POo001)，而結直腸癌組織中，MC組和SRCC組的MUC

3、2蛋白表達水平明顯高于NMc組(PO05)。2Meta分析顯示，MuC2蛋白在結直腸黏液腺癌中的陽性率明顯高于非黏液腺癌((1m，210；95％CI，130—340；盧O002)，而遠端結直腸癌中MUC2蛋白的陽性率明顯低于近端結直腸癌(RR，O74；95％CI，O64一O85；盧0ooO)。T3&T4期結直腸癌患者中MUC2蛋白表達略高于Tl＆T2期，但統(tǒng)計學檢驗并無明顯差異(RR，117；95％CI，100137產0052)。MUC

4、2蛋白表達陽性率在低分化坩高中分化組、Nl&N2＆N3坩No組、MlⅧMo組中均未見明顯差異。3實時定量PCR檢測結果顯示，四株結直腸癌細胞中，Caco2的MUC2mRNA表達量最低，HT29、LoVo和Lsl74T中Muc2mRNA的表達水平分別是Caco2的1560士772、6812士370、7558士2690倍。四種結直腸癌細胞株中，LSl74T細胞的MUC2mRNA表達量最高，因此后續(xù)實驗中使用LSl74T作為靶細胞，進行I塒A

5、i。4經過測序比對，各重組克隆中插入片段序列與設計的oligo序列完全一致，因此四個干擾載體構建成功。構建成功的各干擾質粒分別瞬時轉染LSl74T細胞后，實時定量PCR檢測結果顯示，pcDNATM62GW／EmGFPmiR2干擾載體的基因沉默效果最佳，因此選用該質粒建立穩(wěn)定轉染細胞株。5實時定量PcR和westemblot結果顯示，pcDNA62Gw／EmGFPmiR2干擾載體穩(wěn)定轉染LSl74T細胞后，下調了LSl74T細胞內MUC2