wm-5與抗腫瘤化合物的聯(lián)合用藥及作用機(jī)制研究.pdf

1、本研究的目標(biāo)化合物wm-5具有抗腫瘤活性，屬于一種新型手型娃兒藤堿類似物。娃兒藤生物堿最初是從植物中提取的天然化合物。大量研究發(fā)現(xiàn)，娃兒藤生物堿具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性。增加其極性從而阻止其通過(guò)血腦屏障降低神經(jīng)系統(tǒng)毒性是研究中的重點(diǎn)。
　　本研究工作通過(guò)MTT的方法對(duì)wm-5、吉非替尼、阿霉素、SAHA、喜樹堿、5-FU和小白菊內(nèi)酯對(duì)A549、MCF-7和LLC的抗腫瘤增殖作用進(jìn)行研究，利用Origin作圖并計(jì)算各化合物的IC50值，

2、發(fā)現(xiàn)wm-5與幾種已上市的抗腫瘤藥物相比，有更好的抗腫瘤活性。同時(shí)將wm-5與吉非替尼、阿霉素、SAHA、喜樹堿、5-FU和小白菊內(nèi)酯這幾種抗腫瘤藥物進(jìn)行聯(lián)合用藥，發(fā)現(xiàn)wm-5與這些藥物絕大多數(shù)存在拮抗作用。為進(jìn)一步了解存在拮抗作用的原因及wm-5的作用機(jī)制，選擇wm-5與阿霉素進(jìn)一步觀察單藥及聯(lián)合用藥對(duì)A549細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞周期和細(xì)胞遷移的影響。在細(xì)胞形態(tài)研究中發(fā)現(xiàn)，高濃度的阿霉素使細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡現(xiàn)象，而與wm-5聯(lián)合用藥后，細(xì)胞

3、形態(tài)仍保持完整，因此其能夠說(shuō)明wm-5與阿霉素存在一定的拮抗作用。在細(xì)胞周期研究中發(fā)現(xiàn)，wm-5對(duì)細(xì)胞周期無(wú)顯著影響，而阿霉素能夠?qū)⒓?xì)胞周期阻斷在G2/M期，但當(dāng)wm-5與阿霉素聯(lián)合作用時(shí)，wm-5逆轉(zhuǎn)了阿霉素對(duì)細(xì)胞周期的阻滯作用。在細(xì)胞遷移研究中發(fā)現(xiàn)，高濃度的wm-5能夠顯著抑制劃痕的愈合能力，而與阿霉素聯(lián)合用藥后，對(duì)劃痕愈合的抑制程度降低，可說(shuō)明wm-5與阿霉素(Doxorubicin，Dox)在細(xì)胞遷移方面存在一定拮抗作用。因本實(shí)

4、驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，wm-5的作用靶點(diǎn)是與細(xì)胞骨架相關(guān)的蛋白，后來(lái)又通過(guò)查閱文獻(xiàn)，用western blot的方法研究了wm-5和阿霉素作用后RhoGAP表達(dá)量的變化，發(fā)現(xiàn)wm-5和阿霉素作用后RhoGAP的表達(dá)量均下調(diào)，推測(cè)RhoGAP可能不是wm-5與阿霉素產(chǎn)生拮抗作用的靶點(diǎn)。為更全面的了解wm-5的作用機(jī)制，采用基因芯片的方法，研究wm-5作用后與對(duì)照組相比基因譜表達(dá)的差異，從而初步分析wm-5對(duì)A549細(xì)胞的可能的作用機(jī)制，為其抗