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文檔簡介
1、目的:檢測并分析乳腺癌細胞中蛋白精氨酸甲基轉移酶2(protein arginine methyltransferase2,PRMT2)的下游靶基因,檢測PRMT2表達下調后對相關蛋白表達的影響,并初步探討乳腺癌細胞中PRMT2調控細胞周期蛋白D1(Cyclin D1,CCND1)的分子機制。
方法:采用基因芯片技術對乳腺癌細胞中 PRMT2的下游靶基因進行檢測及分析。從基因芯片結果所檢測出的PRMT2下游靶基因中,選取較有意
2、義的靶基因,利用熒光定量PCR對其進行進一步的驗證和分析。利用Western Blot檢測乳腺癌細胞中PRMT2表達下調后對相關蛋白表達的影響,并初步探討PRMT2調控CCND1的分子機制。
結果:
1、基因芯片檢測顯示:PRMT2影響多個基因的表達,這些基因涉及多個生物過程及相應的細胞信號通路,包括:細胞生長、增殖、癌變、轉錄調節(jié)、免疫應答等,其中CCND1是PRMT2的重要靶基因之一。
2、熒光定量PC
3、R驗證結果提示:乳腺癌細胞中PRMT2基因表達的下調導致靶基因CCND1表達的上調,且與基因芯片的結果保持一致。
3、Western Blot檢測蛋白的表達結果示:乳腺癌細胞中PRMT2蛋白表達下調后導致CCND1蛋白表達上升,且在雌激素(17β-estrodiol, E2)預處理后更明顯。
4、Western Blot檢測表明:乳腺癌細胞中PRMT2通過影響Akt/GSK-3β細胞信號通路抑制CCND1蛋白的表達。
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