

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:人腦膠質瘤及髓母細胞瘤是臨床上常見的神經系統(tǒng)惡性腫瘤,均具有較高的侵襲性及擴散性,目前臨床上尚無有效治療手段,即使采用手術結合放化療也會給患者預后造成很大影響。有研究表明,藥物治療是提高患者生存質量的重要手段。白藜蘆醇是具有多種生物學功效的天然多酚類化合物,其抗腫瘤作用日趨受到重視,本課題旨在研究白藜蘆醇對腦腫瘤細胞系蛋白質組的影響,探討白藜蘆醇可能的作用機制及細胞系敏感性差異原因,尋找可能存在的抗腫瘤作用靶點或腫瘤耐藥機制,為深
2、入開展本領域研究、實現(xiàn)藥物臨床轉化及腫瘤個體化治療提供依據(jù)。實驗內容主要包括(1)蛋白質水平的影響:觀察對白藜蘆醇存在敏感性差異的不同腦腫瘤細胞系,在白藜蘆醇藥物處理前后,蛋白質組的改變。(2)篩選及鑒定:選取若干藥物處理前后存在差異表達的蛋白,運用質譜技術對其蛋白屬性加以鑒定。(3)差異蛋白質驗證:采用免疫組化和RT-PCR等方法,對鑒定出的蛋白在白藜蘆醇處理前后細胞中的表達進行核實。(4)數(shù)據(jù)整理分析:繪制可能存在的調控腫瘤生長的生
3、物網絡。
方法:(1)篩選與藥物處理:選取兩種腦腫瘤細胞系(膠質瘤及髓母細胞瘤),每種細胞系再分別選取對白藜蘆醇敏感性存在差異的細胞系(膠質瘤敏感型:U251、欠敏感型:LN18及髓母細胞瘤敏感型:UW228-3、欠敏感型:DAOY)。細胞系U251、LN18及UW228-3培養(yǎng)于低糖DMEM培養(yǎng)基(Low-Dulbecco's ModifiedEagle Medium,L-DMEM)中,DAOY培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)基(
4、Roswell ParkMemorial Institute1640,RPMI1640)中,各培養(yǎng)基中分別含有10%胎牛血清和1%抗生素(青霉素和鏈霉素),藥物處理組用100μM的白藜蘆醇(Resveratrol,簡寫Res)處理48h,收取細胞片用HE染色觀察細胞形態(tài)。(2)蛋白雙向電泳分離及質譜鑒定:收取細胞提取全蛋白進行雙向凝膠電泳(two-dimensional gelelectrophoresis,2-DE),蛋白質酶切技術對
5、變化差異點進行蛋白質酶切,質譜技術(mass spectrometry,MS)對酶切樣品進行質譜鑒定。(3)蛋白鑒定結果驗證:采用免疫細胞化學及免疫印跡技術對發(fā)現(xiàn)的新的蛋白結果進行驗證,采用RT-PCR技術對調節(jié)新蛋白表達的基因進行基因水平的驗證。
結果:(1)形態(tài)學改變:細胞系U251及UW228-3白藜蘆醇處理前后形態(tài)及數(shù)量上都有明顯的變化,均出現(xiàn)了神經元樣變化且細胞數(shù)量減少,而細胞系LN18及DAOY經過白藜蘆醇處理前后
6、,其形態(tài)和數(shù)量上幾乎沒有改變,提示:U251、UW228-3細胞系和LN18、DAOY細胞系對白藜蘆醇存在明顯敏感性差異。(2)蛋白質組學實驗:1)蛋白質組整體影響:主要以上調為主,膠質瘤細胞系中,U251實驗組,正常組N檢出310個蛋白點,對照組Res共檢出271個蛋白點,其中電腦軟件匹配結果共170個,上調比64.7%;在LN18細胞系中,正常組N檢出422個蛋白點,對照組Res共檢出405個蛋白點,電腦軟件匹配共269個,上調比6
7、4.3%。髓母細胞瘤細胞系中,DAOY組中,正常組N共檢出298個點,對照組Res共檢出342個點,軟件匹配234個,上調比42.7%; UW228-3組中,正常組N共檢出177個點,對照組Res共檢出118個點,軟件配對69個,上調比49.3%。2)差異蛋白質鑒定:蛋白質譜鑒定結果為烯醇化酶,磷酸甘油酸變位酶,角蛋白,膜聯(lián)蛋白,膜突蛋白,熱休克蛋白等。(3)差異蛋白質的驗證:隨機選取幾個蛋白進行RT-PCR驗證,ENO1、PDIA1、
8、AKR1B1等均表現(xiàn)為用藥后表達水平下降,而兩種角蛋白在兩種敏感性細胞系中幾乎未檢測到表達,在不敏感細胞系用藥后略有升高,CAP1在DAOY和U251中出現(xiàn)了上調,CAP1在UW228-3中下調明顯,在LN18中變化不明顯。(4)選取的表達共性的蛋白烯醇化酶ENO1的WB實驗結果與免疫細胞化學(ICC)實驗結果一致,均出現(xiàn)了藥物處理后下調,與雙向電泳結果符合。
結論:(1)初步得到了四種腦腫瘤細胞系白藜蘆醇處理前后蛋白質表達譜
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 膠質瘤間質-上皮轉化的傾向及白藜蘆醇對其的調節(jié)作用.pdf
- 白藜蘆醇誘導髓母細胞瘤細胞分化、凋亡及其相關基因解析.pdf
- RHAMM和CD44在髓母細胞瘤中的表達及其與白藜蘆醇抗髓母細胞瘤作用的關系.pdf
- 腦膠質母細胞瘤血漿差異蛋白質分析.pdf
- Wnt信號通路狀態(tài)與白藜蘆醇抗髓母細胞瘤細胞作用關系的研究.pdf
- 白藜蘆醇對人髓母細胞瘤細胞中VDAC1、CALR表達的調節(jié)及其對腫瘤血管生成的影響.pdf
- 白藜蘆醇對膠質瘤及其腫瘤微環(huán)境中星形細胞的影響
- 白藜蘆醇誘導人髓母細胞瘤細胞凋亡和細胞周期阻滯的分子機制探討.pdf
- 白藜蘆醇對膠質瘤及其腫瘤微環(huán)境中星形細胞的影響.pdf
- 小兒神經母細胞瘤蛋白質組的初步探索.pdf
- 諾帝誘導人惡性膠質瘤細胞分化的差異蛋白質組初步研究.pdf
- 白藜蘆醇對人腦膠質瘤U87細胞遷移與侵襲作用機制研究.pdf
- 白藜蘆醇對人髓母細胞瘤細胞CYP1A1和CYP1B1表達的調節(jié)作用及其與抗腫瘤作用的相關性.pdf
- 白藜蘆醇抑制人腦膠質瘤細胞生長及裸鼠移植瘤血管形成實驗研究.pdf
- CathepsinL在白藜蘆醇誘導的腦膠質瘤細胞凋亡及細胞周期阻滯中的作用.pdf
- 髓母細胞瘤
- 白藜蘆醇誘導髓母細胞瘤細胞NF-κB活化的生物學意義分析.pdf
- 髓母細胞瘤
- 白藜蘆醇對淋巴瘤細胞作用機制的研究.pdf
- Twist與p53在白藜蘆醇誘導髓母細胞瘤分化和凋亡中的作用.pdf
評論
0/150
提交評論