GFP基因修飾的大鼠骨髓間充質干細胞復合PLGA的形態(tài)學觀察.pdf

1、目的：觀察綠熒光蛋白(GFP)基因修飾的大鼠骨髓間充質干細胞(rMSCs)與聚丙交酯-乙交酯(PLGA)膜材料復合培養(yǎng)，及堿性成纖維生長因子(bFGF)-綠熒光蛋白(GFP)基因修飾的大鼠骨髓間充質干細胞與PLGA支架材料復合培養(yǎng)，為后續(xù)種子細胞-基因-支架材料-神經營養(yǎng)因子復合方法構建組織工程化脊髓修復脊髓損傷的可行性提供依據(jù)。
　　 方法：GFP過表達慢病毒載體(lv-GFP)轉染的rMSCs-GFP按8000細胞/cm2與

2、PLGA膜材料復合培養(yǎng)為實驗組，對照組為普通的培養(yǎng)板上的rMSC-GFP，熒光顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學特性，四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)測定兩組細胞每天的生長增殖情況；流式細胞儀測定PLGA膜材料上第3天rMSCs-GFP的細胞周期，及用異硫氰酸熒光素(FITC)標記的抗體CD34、CD90和用PE標記的抗CD44、CD106、CD45、CD11b對在膜材料上培養(yǎng)的第3天rMSCs-GFP進行流式細胞鑒定。轉染的rMSCs-GFP-

3、bFGF及rMSCs-GFP分別以1.0×105/mL接種于PLGA支架材料復合培養(yǎng)，熒光顯微鏡下觀察細胞與支架材料的的復合培養(yǎng)情況。
　　 結果：rMSCs-GFP在PLGA膜上貼壁生長，絕大多數(shù)rMSCs可見綠色熒光，為成纖維細胞樣形態(tài)，散在分布，3d時細胞增多，開始變?yōu)槎嘟切危? d時細胞基本鋪滿膜，多為多角形和短梭形，與普通培養(yǎng)板上細胞相似，細胞的生長增殖在PLGA膜上與培養(yǎng)板上大致相同，細胞周期也大致相同，細胞在PLG