顱腦損傷對周圍神經(jīng)損傷修復的影響.pdf

1、顱腦損傷對骨折愈合有促進作用。相關(guān)研究表明，顱腦損傷后體內(nèi)的細胞因子、神經(jīng)肽及神經(jīng)營養(yǎng)因子、體液因素、機械因素發(fā)生改變，促進了骨折的愈合。同時有文獻報道，神經(jīng)營養(yǎng)因子促進神經(jīng)的修復與再生。那么顱腦損傷后變化的神經(jīng)營養(yǎng)因子是否會影響周圍神經(jīng)的修復與再生，未見相關(guān)報道。
　　本研究旨在尋求顱腦損傷與外周神經(jīng)損傷修復之間的聯(lián)系，進一步探索顱腦損傷的機制及病理生理變化，以及影響的相關(guān)原因，同時擴充外周神經(jīng)修復與再生的理論基礎，指導臨床及治

2、療。
　　目的：
　　研究顱腦損傷對周圍神經(jīng)損傷修復的影響，以及產(chǎn)生影響的機制。
　　方法：
　　1.動物分組與模型制備
　　雄性SD大鼠80只，隨機分為A、B兩組，A組為實驗組，采用經(jīng)典 Feeney法制造自由落體裝置，撞擊大鼠右腦制作中度顱腦損傷模型，同時于大鼠左側(cè)梨狀肌下孔下方1cm切斷坐骨神經(jīng)，應用9-0無損傷線外膜縫合法縫合。B組為對照組，僅對左側(cè)坐骨神經(jīng)切斷后縫合。
　　2.坐骨神經(jīng)指數(shù)測

3、量
　　自制大鼠行走暗箱，分別于術(shù)后4、6、8、12周做足印測量，測量數(shù)值帶入公式，求得坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（SFI）。以SFI值0時為正常，-100時為神經(jīng)完全斷離。
　　3.腓腸肌濕重的測量
　　分別于造模后第4、6、8、12周時，每組取10只大鼠，水合氯醛腹腔注射麻醉處死后，自股骨內(nèi)外髁起點至跟骨結(jié)節(jié)止點完整取下腓腸肌，用電子天平準確稱量肌肉濕質(zhì)量。腓腸肌濕重恢復率（％）=實驗側(cè)濕質(zhì)量（g）/正常側(cè)濕質(zhì)量（g）×10

4、0%。
　　4.HE染色
　　于造模后第4、6、8、12周取材時選取坐骨神經(jīng)斷端，行HE染色。光學顯微鏡下觀察神經(jīng)纖維變化。
　　5.Masson染色
　　于造模后8周和12周，取神經(jīng)術(shù)口兩端0.5cm，切片厚度約3-5um,染色方法參考說明書，封片，光學顯微鏡下觀察神經(jīng)外膜膠原纖維增生情況。
　　6.免疫熒光染色
　　于造模后8周和12周，取神經(jīng)吻合口中段神經(jīng)冰凍切片，NF200免疫熒光染色。熒光顯

5、微鏡下觀察神經(jīng)絲出現(xiàn)情況。
　　7.辣根過氧化物（HRP）示蹤技術(shù)
　　于造模后第4、6、8、12周時，每組取10只大鼠，水合氯醛腹腔注射麻醉后，于左側(cè)坐骨神經(jīng)斷端以遠0.5mm處，輕微挫夾神經(jīng)后，注入30%HRP溶液，72h后深麻醉下開胸，經(jīng)左心室升主動脈插管，用溫生理鹽水200mL沖洗血管，隨后用含2%多聚甲醛和2%戊二醛的0.1mol/L PBS固定液400mL灌流固定，取坐骨神經(jīng)脊神經(jīng)節(jié)以及相應的T4-5脊髓節(jié)段，橫

6、斷面連續(xù)振蕩切片50μm。行聯(lián)苯胺（BDHC）法染色，中性紅復染。光鏡下觀察神經(jīng)節(jié)及脊髓前角運動神經(jīng)元中含藍染顆粒的胞體數(shù)量。
　　8.透射電鏡觀察
　　于造模后8周和12周取材，取材以神經(jīng)吻合口為中心修剪成2mm×lmm×1 mm組織塊，固定、包埋、染色，透射電鏡下觀察新生髓鞘超微結(jié)構(gòu)及細胞器形態(tài)。
　　結(jié)果：
　　1.顱腦損傷對周圍神經(jīng)損傷大鼠坐骨神經(jīng)功能指數(shù)的影響
　　暗箱測試結(jié)果顯示，造模后第4周，

7、2組大鼠SFI接近（P>0.05）；從第4周損傷組大鼠SFI開始降低，隨時間的延長降低的幅度減緩，而對照組大鼠SFI從第6周開始下降；第8、12周時，損傷組大鼠SFI均低于對照組（P<0.01）。
　　2.顱腦損傷對周圍神經(jīng)損傷大鼠腓腸肌濕重的影響
　　2組大鼠實驗側(cè)腓腸肌顏色均較健側(cè)蒼白，肌萎縮明顯，且造模后4周時2組的大鼠腓腸肌濕重恢復率接近（P>0.05），而6-12周損傷組大鼠腓腸肌恢復率顯著高于對照組（P<0.01

8、）。
　　3.顱腦損傷對周圍神經(jīng)損傷大鼠坐骨神經(jīng)病理變化的影響
　　HE染色顯示，造模后4周時，損傷組、對照組兩組無明顯差異，未見神經(jīng)纖維通過斷端，神經(jīng)斷端紊亂，無完整神經(jīng)纖維，但可見損傷組近端出現(xiàn)較多神經(jīng)纖維細胞，而對照組周圍大量空泡壞死細胞。6周時，損傷組可見神經(jīng)纖維通過斷端，但較少，稀疏，粗細不均，排列紊亂；對照組未見神經(jīng)纖維通過，周圍空泡變性細胞仍然較多見，部分神經(jīng)存在粘連，斷端以遠較細。8周時，損傷組可見較多神經(jīng)纖

9、維通過斷端，粗細漸趨一致，排列較為整齊，但神經(jīng)纖維較細；對照組也可見神經(jīng)纖維通過斷端，但粗細不均，排列紊亂，部分神經(jīng)存在粘連，斷端以遠較細。12周時，損傷組可見通過斷端神經(jīng)纖維數(shù)量較多，直徑較粗，排列一致，與正常纖維無明顯差異；對照組也有較多神經(jīng)纖維通過斷端，粗細一致，神經(jīng)纖維已呈典型的波浪狀排列。
　　4. Masson三色法染色
　　術(shù)后8、12周，鏡下均可見對照組在吻合口處膠原纖維增生明顯多于損傷組．且排列紊亂，神經(jīng)纖

10、維稀少，神經(jīng)纖維走行失去波浪狀結(jié)構(gòu)。
　　5.免疫熒光染色
　　術(shù)后8、12周，實驗組在再生神經(jīng)的密度、排列規(guī)則程度以及神經(jīng)髓鞘厚度等方面均要優(yōu)于對照組，表明實驗組損傷的神經(jīng)得到了較快的修復和再生，神經(jīng)纖維再生的質(zhì)量較高。
　　6.辣根過氧化物（HRP）示蹤技術(shù)
　　光鏡下可見，造模后第4周時，2組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)節(jié)、相應脊髓節(jié)段前角均未發(fā)現(xiàn)標記成藍黑色的神經(jīng)元胞體，可見大量的腫脹細胞；6周時，損傷組大鼠坐骨神經(jīng)

11、神經(jīng)節(jié)內(nèi)可見被標記的神經(jīng)元胞體，對照組中未見神經(jīng)元胞體；8周時，損傷組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)節(jié)、相應脊髓節(jié)段前角內(nèi)可見明顯標記細胞，平均12-15個/視野，對照組較少，平均2-5個/視野；12周時，2組均可見明顯的標記細胞。
　　7.透射電鏡觀察
　　術(shù)后8周、12周兩組均有不同數(shù)量的有髓神經(jīng)纖維，且術(shù)后12周有髓神經(jīng)纖維數(shù)量較8周多，結(jié)構(gòu)更清晰，層次更分明，尤其損傷組更接近正常神經(jīng)結(jié)構(gòu)。實驗中還可以看出，術(shù)后8周、12周損傷組再