Apelin-13通過激活PKCα上調(diào)THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞ABCA1的表達.pdf

1、目的：Apelin家族（包括apelin-13）是孤兒G蛋白偶連受體APJ的配體，是新近發(fā)現(xiàn)的一種脂肪因子，具有血管保護及抗炎的作用。有研究發(fā)現(xiàn)PKC可能參與apelin細胞內(nèi)信號的傳導。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1（ABCA1）作為一種重要的膽固醇轉(zhuǎn)運體，能通過促進細胞內(nèi)膽固醇流出，減少泡沫細胞形成，起到抗動脈粥樣硬化的作用。但是apelin對ABCA1是否具有調(diào)節(jié)作用尚不清楚。本研究選取 THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞作為研究對象，探

2、討 apelin-13對胞內(nèi)ABCA1表達及其介導的膽固醇流出的影響及其機制。
　　方法：選取ox-LDL誘導的THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞為主要研究對象，觀察不同濃度apelin-13(0,1,10,100,1000 nM)及其處理細胞不同時間（0,6,12,24,48h）后，細胞內(nèi)ABCA1表達情況。油紅O染色及高效液相色譜法檢測細胞內(nèi)膽固醇含量，液體閃爍計數(shù)法檢測細胞內(nèi)膽固醇流出情況。實時定量 PCR檢測ABCA1 mRN

3、A水平。Western blot檢測ABCA1、PKC及磷酸化PKC蛋白水平。Calpain活性檢測試劑盒檢測calpain的活性。用apelin活性抑制劑PTX、PKC抑制劑或用轉(zhuǎn)染PKCα siRNA對apelin-13作用下的細胞共處理24 h，檢測細胞內(nèi)ABCA1、磷酸化ABCA1水平及calpain活性，并觀察對膽固醇流出的影響。
　　結(jié)果：Apelin-13以時間及劑量依賴性上調(diào) ABCA1的蛋白表達，但對其 mRNA

4、 水平無顯著影響。進一步研究發(fā)現(xiàn)apelin-13通過磷酸化ABCA1及抑制calpain的活性，減少ABCA1蛋白降解，從而增加細胞內(nèi)膽固醇流出；用 PKC抑制劑預處理或轉(zhuǎn)染PKCα的小干擾RNA，apelin-13對細胞內(nèi)ABCA1蛋白、ABCA1磷酸化水平及calpain活性等的影響隨即取消。
　　結(jié)論：在THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞中，apelin-13通過激活PKCα抑制calpain活性，并磷酸化ABCA1