逍遙散對慢性應激大鼠海馬神經原代細胞L-型-鈣離子通道快速作用機制的影響.pdf

1、研究目的：
　　總結研究逍遙散治療郁病相關疾病的機制，在逍遙散抗慢性應激損傷的基礎上展開相關實驗，來明確慢性應激損傷的機制或探求慢性應激損傷可能存在的一些中樞機制。
　　研究方法：
　　SPF級 Wistar雄性大鼠27只，體重180g-230g，隨機分為空白對照組、慢性應激模型組、逍遙散治療組3組，每組9只大鼠，參考 Cart的（多相性）應激模型方法，用五種應激源給與刺激，刺激方法包括：足底電擊、冰水游泳、禁水、禁食

2、和束縛。為避免大鼠適應，相鄰兩天不能出現(xiàn)重復，使其無規(guī)律性，并且每天刺激安排不定時隨機，連續(xù)刺激21天。于最后給藥刺激2h左右后股動脈取血，血液離心、分離血清、滅活并標記。無菌條件0.22um抽濾除菌后lml分裝保存。
　　取 Wistar乳鼠海馬神經元代細胞，實驗分為空白對照組、正常模型血清組、慢性應激模型血清組、逍遙散治療模型血清組、慢性應激模型組血清+MK-801組、逍遙散治療模型血清+MK-801組、慢性應激模型組血清+N

3、ifedipine組、逍遙散治療模型組血清+Nifedipine組、慢性應激模型組血清+MK-801+Nifedipine組、逍遙散治療模型組血清+MK-801+Nifedipine組十個組。空白對照組細胞指標變化，非單一因素的，先加入工具藥，再加入相應的干預血清，研究其對 Wistar乳鼠影響海馬細胞的表達，并致力于發(fā)掘祖國傳統(tǒng)中藥逍遙散對慢性應激損傷和機制可能存在的作用。
　　以免疫熒光方法檢測細胞純度；用MTT方法檢測元代細

4、胞存活率；用激光共聚焦顯微鏡技術檢測游離鈣離子濃度。
　　研究結果：
　　1、培養(yǎng)7天，乳鼠神經元代細胞結構完整，胞體清晰，純度最高可達83.71％，平均為76.32%。
　　2、各組神經元代細胞內鈣離子變化有明顯差異。第（1）組空白對照組細胞內鈣離子表達為標準，第（2）組（正常模型血清組）組與第（1）組（空白模型血清對照組）細胞內鈣離子表達無統(tǒng)計學差異，其他各組均有統(tǒng)計學差異；第（3）組（正常模型血清組）鈣離子表達下

5、調不明顯；第（4）組（慢性應激模型血清組）細胞內鈣離子表達明顯上調；第（5）組（逍遙散治療模型血清組）細胞內鈣離子內流升高，但明顯低于第（4）組；其他各組鈣離子內流表達低于第（1）組，第(9)組(慢性應激模型組血清+MK-801+Nifedipine組)與第(10)組(逍遙散治療模型組血清+MK-801+Nifedipine)細胞內鈣離子表達明顯下調。
　　研究結論：
　　中藥逍遙散抗慢性應激損傷可能從多種信號途徑起作用，如