‘水晶’梨褐色果皮突變體木質素合成相關基因的克隆與表達分析.pdf

1、本研究以‘水晶’梨及其褐色果皮突變體幼果期、果點變褐期、果皮變褐期、成熟期果皮為試驗材料，克隆木質素合成關鍵基因及合成途徑上游轉錄因子MYB基因，并對克隆的基因序列進行生物信息學分析。同時，對木質素合成關鍵基因及轉錄因子MYB基因的表達進行分析。結果表明:
　　1.以‘水晶’梨及其褐色果皮突變體的葉片DNA為模板，克隆得到了木質素合成相關基因CAD1和POD4的全長基因序列、4CL1的部分基因序列，以及MYB86的全長基因序列。‘

2、水晶’梨及其褐色果皮突變體中，四個基因的外顯子序列相同，翻譯得到的氨基酸序列一致，而內含子存在單核苷酸差異。進一步的生物信息學分析顯示，CAD1、POD4、4CL1、MYB86四個基因序列與梨屬中已報道的序列具有很高的同源性，序列同源性均在90％以上。蛋白空間結構分析表明，CAD1、POD4、4CL1、MYB86蛋白二級結構主要由α-螺旋和隨機卷曲組成，且均無跨膜結構域，其中4CL1和POD4為疏水蛋白，CAD1和MYB86為親水蛋白。

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　　2.對‘水晶’梨及其褐色果皮突變體不同時期PAL2、4CL1、CAD1、POD4和MYB86基因的表達分析表明，這五個基因的表達均呈先升后降的趨勢，在果點變褐期表達量最高，并且在‘水晶’梨中，這五個基因在四個時期的表達量均低于褐色果皮突變體，表明PAL2、4CL1、CAD1、POD4與褐色果皮的形成有正相關性，MYB86與PAL2、4CL1、CAD1和POD4四個基因的表達呈正相關。
　　3.本試驗獲得了‘水晶’梨及其