Gli-1基因的RNAi對前列腺癌DU145細胞的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:使用siRNA抑制核轉錄因子Gli-1基因的表達,篩選有效的干擾序列,觀察Gli-1基因的沉默對DU145細胞的增殖、凋亡及侵襲力的影響。為針對Gli-1基因的RNA干擾(RNAinterference,RNAi)提供新的有效作用靶位,為針對Gli-1的前列腺癌基因治療提供實驗基礎。
  方法:1.設計并體外化學合成3對針對Gli-1基因的特異性siRNA與1對綠色熒光標記的FAM-siRNA作為陰性對照。
  2.使

2、用脂質(zhì)體轉染法將FAM-siRNA轉染入DU145細胞,熒光顯微鏡下觀測siRNA的轉染效率。利用RT-PCR和Western Blot法分別檢測各組細胞Gli-1mRNA及蛋白的表達。計算表達率,選取具有最大抑制作用的siRNA作為最佳干擾序列。
  3.將最佳干擾序列siRNA轉染入前列腺癌DU145細胞。用CCK-8(Cellcounting kit-8)法檢測siRNA對DU145細胞增殖的影響,Annexin V-PI法

3、檢測siRNA對細胞凋亡的影響,transwell小室法檢測轉染siRNA后DU145細胞侵襲能力的變化。
  結果:熒光顯微鏡下觀測,F(xiàn)AM-siRNA轉染效率達78%;RT-PCR結果顯示,轉染Gli-1-siRNA的各組細胞的Gli-1 mRNA表達水平均低于陰性對照組與空白組,其中以siRNA-3轉染組作用最明顯,其Gli-1 mRNA表達率僅為(38.4±4.0)%;Western-blot法檢測也證實siRNA-3的作

4、用效果最佳,該組細胞Gli-1蛋白的表達率僅達(31.9±5.1)%;CCK-8檢測結果顯示,siRNA-3轉染后24h、48h、72h的相對增殖率與空白對照組及陰性對照組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);Annexin V-PI法檢測顯示,siRNA-3轉染組的早晚期凋亡細胞數(shù)分別是(19.0±2.2)個/HP和(17.0±2.7)個/HP,與空白對照組和陰性對照組相比,差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);侵襲實驗顯示,siR

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