基于高密度單核苷酸多態(tài)性微陣列的胚胎植入前全面遺傳檢測.pdf

1、目前鑒于不孕不育人群的增加，輔助生殖技術，包括體外受精和胞漿內精子注射技術的臨床操作逐漸增加。但與自然生產相比，這些技術由于鑒別異常胚胎缺陷的能力有限，以及植入多胚胎以確保受孕率等操作的使用，會增加胎兒出生缺陷的風險，影響嬰兒的出生率。胚胎植入前遺傳診斷是在常規(guī)體外受精將胚胎植入母體之前，通過一系列的遺傳檢測獲得胚胎的遺傳信息，發(fā)現(xiàn)遺傳缺陷，確保植入更少但質量更優(yōu)的胚胎。
　　現(xiàn)在胚胎植入前遺傳檢測普遍采用的遺傳檢測方法包括PCR

2、和熒光原位雜交，用以檢測單基因突變，以及有限分辨率的染色體異常。本研究旨在建立一種能全面分析胚胎遺傳信息的遺傳檢測方法，采用的是含有約300,000檢測位點的單核苷酸多態(tài)性微陣列的方法。高密度芯片的位點覆蓋全基因的23對染色體，對于染色體片段的平均分辨長度約10.6 kb，因此可在一次檢測中探測到從整條染色體到染色體微小片段的缺失、增加、插入、非平衡易位和染色體數目異常等。
　　本研究的第一步是要建立多重置換單細胞全基因組擴增方法

3、，將胚胎植入前活體取樣的單個細胞基因組擴增到單核苷酸多態(tài)性微陣列可以檢測的量。經過產物濃度檢測、瓊脂糖凝膠電泳和384位點單核苷酸多態(tài)性微陣列驗證，擴增平均產量為2.70μg，產物片段長度大于2 kb，全基因組覆蓋率近99％，在數量和質量上均完全符合下游遺傳檢測的要求
　　第二步采用12個DNA樣品，建立并驗證了用以檢測細胞染色體異常的單核苷酸多態(tài)性微陣列高密度芯片方法。12個DNA樣品包括人類染色體異常細胞系的標準gDNA樣品，