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文檔簡介
1、目的:探討鼻咽癌細胞株Syk基因啟動子甲基化與其mRNA和蛋白質表達情況之間的關系。
方法:培養(yǎng)鼻咽癌細胞株CNE-1(高分化)、CNE-2(低分化)和永生化非癌性人鼻咽粘膜上皮細胞株(NP69)。
(1)甲基化特異性聚合酶鏈反應(Methylation-specific PCR,MSP)法檢測各細胞株中Syk基因的甲基化程度,分析Syk基因啟動子甲基化程度與鼻咽癌惡性程度之間的關系。統計學分析:采用SPSS
2、17軟件進行統計學分析,實驗重復3次,結果以均數±標準差(X±s)表示,應用單因素方差分析比較3株細胞株Syk啟動子甲基化率。P<0.05為差異具有統計學意義。
(2)Q-RT-PCR法檢測各株細胞中Syk基因mRNA表達水平,分析Syk基因mRNA表達水平與鼻咽癌惡性程度之間的關系。統計學分析:采用SPSS17軟件進行統計學分析,實驗重復3次,計量資料以均數±標準差(x±s)表示,應用單因素方差分析比較各細胞株Syk m
3、RNA表達情況。P<0.05為差異具有統計學意義。
(3)Western Blot方法檢測各細胞株中Syk蛋白表達情況,分析Syk蛋白表達水平與鼻咽癌惡性程度之間的關系。統計學分析:采用SPSS17軟件進行統計學分析,每項實驗重復3次,計量資料以均數±標準差(X±s)表示,應用單因素方差分析比較各細胞株Syk蛋白表達情況。P<0.05為差異具有統計學意義。
結果:
(1)MS-PCR法檢出CNE
4、-1和CNE-2細胞Syk啟動子甲基化率分別為36%±3.6%和62%±4.5%,而NP69未檢測到甲基化。
(2)Q-RT-PCR法檢出Syk mRNA在CNE-1和CNE-2的表達水平均低于NP69細胞,分另0為42%±3.5%和28%±2%。
(3)Western Blot法檢出Syk蛋白在CNE-1和CNE-2的表達水平均低于NP69細胞,分別為36%±4.5%和16%±2.5%。
結論
5、:
1.NP69細胞株的Syk mRNA表達明顯高于2株鼻咽癌細胞株,且高分化CNE-1Syk mRNA表達高于CNE-2,提示Syk mRNA表達與鼻咽癌細胞株的分化程度高低呈正相關。
2.NP69細胞株Syk蛋白表達高于2株鼻咽癌細胞株,高分化CNE-1 Syk蛋白表達高于CNE-2,提示Syk蛋白表達與鼻咽癌細胞株的分化程度高低也呈正相關。
3.NP69細胞株中檢測不到Syk基因啟動子甲基
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