凋亡相關分子在鼻咽癌中的表達及其意義.pdf

1、背景與目的： 細胞凋亡異常是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機制之一。細胞凋亡分子機制主要是通過蛋白通路調節(jié)系統(tǒng)來實現(xiàn)的，在細胞凋亡的過程中半胱天冬酶家族(caspases)起著關鍵作用，而這些凋亡效應蛋白受一組凋亡抑制蛋白(inhibitors of apoptosis，IAPs)的調控。Smac/DIABLO(以下簡稱Smac)是一種重要的凋亡調節(jié)蛋白，能解除IAPs對caspase的抑制作用，進而促進細胞凋亡。在多種腫瘤組織中Smac表

2、達顯著降低或缺失，提示其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關系密切。PUMA/Bbc3(以下簡稱PUMA)是新近發(fā)現(xiàn)的Bcl—2家族BH—3亞家族中的促凋亡成員，在p53依賴和非依賴途徑的細胞凋亡啟動中發(fā)揮重要的作用。本實驗旨在探討Smac和PUMA在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用和意義，為鼻咽癌的臨床診治和預后預測提供依據(jù)。具體內容包括研究Smac和PUMA在鼻咽癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關系，并從細胞水平探討Smac基因的表達對鼻咽癌細胞凋亡的影響。

3、 方法： 收集130例鼻咽癌和63例鼻咽慢性炎病例，采用免疫組織化學的方法分別檢測Smac和PUMA的表達，統(tǒng)計分析其表達與臨床病理特征的相關性。采用TUNEL法檢測鼻咽癌組織的凋亡指數(shù)，統(tǒng)計分析Smac和PUMA的表達與鼻咽癌凋亡指數(shù)的相關性。在培養(yǎng)細胞中觀察高表達Smac對鼻咽癌細胞凋亡的影響。 結果： 1.Smac和PUMA在鼻咽癌組織中呈低表達 免疫組化結果顯示Smac陽性表達定位于胞漿。

4、63例鼻咽慢性炎組織中，Smac陽性表達率為95.2％，130例鼻咽癌組織Smac陽性表達率為82.3％。兩組陽性率的差異有統(tǒng)計學意義(P=0.014)。結果表明鼻咽癌組織中Smac的表達水平顯著低于鼻咽慢性炎組織。 免疫組化結果顯示PUMA陽性表達定位于胞漿。63例鼻咽慢性炎組織中，PUMA陽性表達率為88.9％，130例鼻咽癌組織PUMA陽性表達率為72.3％。兩組陽性率的差異有統(tǒng)計學意義(P=0.010)。結果表明鼻咽癌組

5、織中PUMA的表達水平顯著低于鼻咽慢性炎組織。 2.Smac在鼻咽癌病例中的表達與臨床分期和淋巴結分期呈負相關，與預后呈正相關 Smac在鼻咽癌病例中表達強度有差異。130例鼻咽癌組織中Smac強陽性病例32例(24.6％)，弱陽性病例75例(57.7％)，陰性病例23例(17.7％)。Smac的表達與臨床分期(P=0.003)和淋巴結分期(P=0.008)呈負相關。結果提示鼻咽癌組織中Smac的表達水平高低與鼻咽癌臨

6、床發(fā)展進程快慢相關。 鼻咽癌組織中Smac陽性表達的患者比陰性表達的患者預后好(P=0.002)，且與患者的無瘤生存期呈正相關(P=0.001)。 3.Smac、PUMA的表達與鼻咽癌病例的凋亡指數(shù)呈正相關在130例鼻咽癌患者的石蠟組織中，Smac和PUMA的表達與凋亡指數(shù)的相關系數(shù)分別為0.237(P=0.037)和0.453(P=0.000)。Smac和PUMA的表達呈正相關，相關系數(shù)為0.434(P=0.000)。

7、另外，鼻咽癌病例的凋亡指數(shù)與患者血清中EB—VCA—IgA的滴度呈正相關，相關系數(shù)為0.240(P=0.034)。 4.體外高表達Smac能促進絲裂霉素誘導的鼻咽癌細胞凋亡在低劑量絲裂霉素誘導作用下，轉染了pcDNA3.1(+)—smac組的HONE-1細胞生存率較pcDNA3.1(+)組的細胞生存率明顯下降。流式細胞術結果表明，pcDNA3.1(+)加絲裂霉素組的凋亡率為19.3％，pcDNA3.1(+)—smac加絲裂霉素組

8、的凋亡率為31.2％，組間凋亡率差異有統(tǒng)計學意義(P=0.009)。結果提示體外高表達Smac能促進絲裂霉素誘導的鼻咽癌細胞凋亡。 結論： 1.Smac和PUMA在鼻咽癌組織中呈低表達，Smac的表達與臨床分期和淋巴結分期呈負相關，并與預后呈正相關，結果提示Smac和PUMA低表達是鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展的分子事件。 2.Smac和PUMA的表達與鼻咽癌病例的凋亡指數(shù)呈正相關，結果提示Smac和PUMA是鼻咽癌細胞凋亡