ESM-1在腎移植急性排斥中的檢測和臨床意義.pdf

1、得益于組織配型及強力免疫抑制劑的應用，腎移植成為臨床治療終末期腎病的主要方法，但排斥反應仍然是長期未解的難題。供、受者完全耐受仍然是一個理想的目標。急性排斥反應(AR)的發(fā)生，不僅直接關系到移植的成敗，甚至早期摘除移植器官。而且與移植物長期存活及慢性排斥反應(CR)的發(fā)生相關。 目前對AR的診斷，主要依據(jù)受者的臨床表現(xiàn)、實驗室檢查、病理活檢及治療反應。病理活檢是目前明確診斷排斥反應的金標準，但存在有創(chuàng)操作、取材不便等不足，并且臨

2、床上經(jīng)常出現(xiàn)因診斷需要而再三穿刺活檢的情況，這顯然不為臨床醫(yī)生和患者所接受。有鑒于此，許多學者致力于開發(fā)快速、早期、敏感、可反復進行、重復性好的診斷AR新方法。方法雖然很多，但均存在許多缺陷，如影響因素多、個體差異大、特異性和敏感性差別大等。因此尋求敏感特異的非侵襲性診斷指標，對于預測和診斷排斥反應及其轉歸，制定個體化免疫抑制方案均具有重要意義。 血管內皮細胞(EC)是血液與組織間的重要屏障，是器官移植后供、受者細胞間最早接觸的

3、場所，最早被免疫系統(tǒng)識別，且具備獨特的生物學功能，在移植排斥反應中有重要作用。文獻報導，排斥反應時受體白細胞在經(jīng)過一系列活化過程后滲透入移植物；同時，移植物白細胞也從血管遷徙至受體淋巴結。上述步驟中，從白細胞與內皮細胞粘附開始即發(fā)生細胞粘連與滾動、啟動粘附、緊密粘附和遷徙等生物行為過程，EC在每一個步驟中均發(fā)揮重要的作用。 存在于外周血液循環(huán)中的內皮細胞，稱為循環(huán)內皮細胞(CECs)。是源于血管內皮的脫落細胞，反映血管內皮損傷、

4、衰老及再生的動態(tài)過程，是目前活體內特異而直接地反映血管損傷的標志物，在很多血管損傷性疾病中顯著升高，能反映不同血管性疾病內皮細胞的功能及代謝等的變化。ElianeR等發(fā)現(xiàn)，在急性排斥反應時，外周血中CEC數(shù)量明顯增加，認為腎移植患者血中CEC主要來源于供。腎，可以反映移植。腎的血管損傷程度。 ESM-1，又叫內皮細胞特異性分子，是毛細血管、小動脈、小靜脈等血管組織的共同特征性分子，可在許多正常組織的血管內皮細胞表達。文獻報道ES

5、M-1分子高度限制在內皮細胞，可能參與內皮細胞的活動，在內皮細胞依賴的病理性過程中發(fā)生作用，因此認為ESM-1可以作為內皮細胞激活的新標志物。本課題采用隨機對照的方法觀察了ESM-1在腎移植術后患者外周血循環(huán)內皮細胞以及腎組織的表達及變化，并在大鼠腎移植模型中觀察不同免疫狀態(tài)下ESM-1的表達及變化，最后就ESM-1的監(jiān)測在腎移植急性排異反應診斷中的臨床應用價值進行了探討。 主要研究內容： 1.通過檢測腎移植術后急性排斥

6、反應患者及正常人外周血CECs中的ESM-1mRNA及移植腎組織中ESM-1蛋白表達，了解ESM-1的變化是否能夠反映內皮細胞的受損狀態(tài)及腎移植術后排斥反應的進程。與傳統(tǒng)的AR診斷指標進行相關性分析，探討ESM-1的變化在AR診斷中的應用價值。 2.建立雙側供腎大鼠腎移植急排模型，觀察術后移植腎功能及病理變化并為第三部分實驗打下基礎。 3.采用隨機對照的方法，在大鼠腎移植模型中，通過聯(lián)合應用藥物誘導HO-1增加，觀察HO

7、-1表達增加是否可以改善移植腎內皮細胞功能、減輕移植腎病理損害。并在Hemin干預治療后對ESM-1進行檢測，觀察是否可以反映內皮細胞的損傷、變化情況。并對ESM-1的臨床應用價值展開探討。 主要結果： 1.腎移植病人術前ESM-1mRNA表達時為3.47±1.05，術后發(fā)生排斥反應時ESM-1mRNA表達明顯增加，最高為11.38±2.35。急排病人ESM-1蛋白表達為0.32±0.06，較正常腎臟ESM-1蛋白表達(

8、0.18±0.04)明顯提高(Western-blot法)。 2.動態(tài)監(jiān)測移植腎功能正常組的外周血ESM-1mRNA表達較術前有所升高，但變化不明顯。 3.因急性腎小管壞死、外科原因等因素引起移植腎功能不全的患者，動態(tài)監(jiān)測其外周血ESM-1較術前有所升高，但無統(tǒng)計學差異。 4.雙側供腎手術方法采用標準顯微外科技術，獨自一人完成，手術成功率較高。與單側供腎術式相比，兩組取腎時間有顯著差異，其余耗時以及移植腎功能、移

9、植腎病理、術后存活時間等方面無顯著差異。從而達到了節(jié)省實驗費用、縮短手術時間的目的。 5.應用Hemin干預治療后，大鼠移植腎組織HO-1蛋白的表達及活性明顯增強(最高為8.63±1.26nmol/mg.min)。移植腎組織細胞凋亡率降低(19.52±2.73％)。移植腎病理損害程度比急性排斥反應組輕，但比CsA組病理表現(xiàn)更嚴重。 6.腎移植術后大鼠外周血ESM-1mRNA及移植腎組織中ESM-1蛋白表達增加，發(fā)生排斥反

10、應的大鼠ESM-1mRNA表達顯著增加。應用Hemin藥物干預治療后，發(fā)現(xiàn)ESM-1表達下降。 主要結論： 1.ESM-1具有高度的內皮細胞特異性，外周血ESM-1mRNA及移植腎組織ESM-1蛋白表達變化可反應內皮細胞損傷程度。 2.ESM-1可作為AR的預測及診斷指標，具有高度敏感性及特異性。 3.聯(lián)合應用藥物誘導HO-1增加后可以減少移植腎細胞凋亡、改善移植腎內皮細胞功能并減輕移植腎病理損害。